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聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE胶的配制

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51006

各种浓度PAGE胶的配制(DNA电泳用)

50ml体系:

丙烯酰胺有效分离(bp)二甲苯青溴酚蓝丙烯酰胺30%(ml)10×TBE(ml)ddH2O(ml)TEMED(µl)过硫酸铵10%(µl)
3.5%100-10004601005.83539.1725.0250
5.0%100-500260658.33536.6725.0250
8.0%60-4001604513.33531.6725.0250
12.0%40-200702020.0525.0025.0250
15.0%25-150601525.0520.0025.0250
20.0%5-100451233.33511.6725.0250

5ml体系:

丙烯酰胺丙烯酰胺30%
(ml)
10×TBE
(ml)
ddH2O
(ml)
TEMED
(µl)
过硫酸铵10%
(µl)
3.5%0.5830.53.9172.525
5.0%0.8330.53.6672.525
8.0%1.3330.53.1672.525
12.0%2.000.52.52.525
15.0%2.500.52.02.525
20.0%3.3330.51.1672.525

1、丙烯酰胺30%为29:1(质量比,丙烯酰胺:双甲叉丙烯酰胺)

2、TEMED 可以加到1ul/ml。

不同浓度丙烯酰胺和DNA的有效分离范围表

丙烯酰胺(%)有效分离范围(bp)溴酚兰~K~Htd~M~Ktd~M二甲苯青~K~Htd~M~K~Htr~M~Ktr~M~Ktd~M3.5~K~Htd~M~Ktd~M100~2000100460
5.080~50065260
8.060~40045160
12.040~2003070
15.025~1501560
20.010~1001245

凝胶的制备过程:

1、 按要求装配好垂直电泳板,两块玻璃板的两侧及底部用1%的琼脂糖封边,防止封闭不严而使聚丙烯酰胺液漏出。

2、 将装好的玻璃电泳板倾斜成45~60℃角。

3、 按表3配制所需%浓度凝胶的毫升数。

4、 加入TEMED后,立即混匀,缓缓倒入两玻璃板间的胶床中,直到液体接近溢出时为止。

5、 立即插入适当的梳子,密切注意防止梳齿下产生气泡,用一有力的夹将梳子夹在一边的玻璃板上,然后将玻璃板斜靠在物体上,使成10°角,可减少液体泄漏的机会。

6、 室温聚合一小时后,将玻璃板插入电泳槽中,上紧,倒入0.1XTBE缓冲液。

7、 小心取出梳子,加样。

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