激光扫描共聚焦显微镜样品制备特点
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激光扫描共聚焦显微镜样品制备特点:
(1)样品制备基本要求:激光扫描共聚焦显微镜与荧光显微镜样品制备基本相同,不同的是组织可切为厚切片,实现三维重建图像。由于激光扫描共聚焦显微镜通常为倒置式,载玻片上附着的盖玻片面积要大,上机观察时盖玻片应朝下放置在载物台上。
(2)常见器皿:激光扫描共聚焦显微镜的载物台设计灵活,可以放置载玻片、35mm和50mm平皿、培养皿、活细胞观察及灌流系统等多种常见器皿。要根据实验目的、样品种类及形态、物镜的工作距离及所用激光扫描共聚焦显微镜的载物台设置等条件确定样品观察所用的承载方式。常见的器皿有盖玻片、载玻片及Petri皿(Petri dish)等。应注意器皿底盘的厚度不能太厚。因为激发光要透过器皿的底部才能照射到样品上。同时.所用器皿要干净,无划痕。
Petri皿,又称glass bottomdish或coverslip bottomdish,其结构特点是在塑料平皿的圆形底部中央打出一个直径l~mm左右的圆孔并从平皿底部的外面粘上一片厚度约为0.17mm透光性极好的盖玻片以密封圆孔,配有平皿盖。使用时,将相配套的Petri皿支架放到显微镜的载物台上。再将载有样品的Petri皿放人到该Petri皿支架,即可用显微镜观察样品或者用共聚焦显微镜扫描样品。
Petri皿兼有平皿和盖玻片的双重特点:
①其底部的盖玻片为透光性极好的光学玻璃,透光性比塑料平皿好;
②底部盖玻片厚度不大于0.17mm,适用于高倍镜观察和高质量成像;
③观察时.细胞上方有液体覆盖,不必加盖玻片,因此能够保持细胞等样品不变形,不干燥,保持其原有形态;
④可以在皿中随时加入或吸出液体,因此可以随时对细胞进行洗涤或加刺激物等处理,利于维持细胞的生长和实验操作;
⑤用倒置显微镜观察细胞时,可以盖着Petri皿盖观察,保持细胞的无菌状态,利于细胞培养:
⑥节省试剂和细胞,简化操作过程。
与载玻片和盖玻片相比,Petri皿的缺点是价格高、体积大。盛装液体移动时易溅出。