流式细胞仪PI染色死细胞方法

PI 能够插入双链 DNA 中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。

Ⅰ 、材料

1、 PI （ e.g.,Cat #537059,Calbiochem,San Diego,CA ）

2、 缓冲体系： 1 × PBS(Ca2+ and Mg2+ free,e.g.,Cat#9240,Irvine Scientific,Santa Ana,CA)+2% 新鲜小牛血清＋ 0.1% 叠氮钠

A、 PI 缓冲液

用缓冲液将 PI 溶解至终浓度为 1mg/ml 中，于 4 ℃ 下密封避光保存 1 个月。

B、 PI 浓缩液

用缓冲液将 PI 溶解至终浓度为 500mg/ml ，于 4 ℃ 下密封避光保存。我们已经检测过将 PI 浓缩液放置数月后，并无观察到染色活性的丢失。

Ⅱ 、方法：

将样品细胞按程序描述的方法用 FITC 标记的单克隆抗体进行单色染色。

A、 在最后的洗涤步骤后，将样品细胞悬浮于 PI 缓冲液中，于 4 ℃ 下密封避光保存以备通过流式细胞仪分析；

B、 在最后的洗涤步骤后，如前述将样品细胞悬浮后备用。如果您想检测样品细胞活力，在每一管中加入 2 μ l 的 PI 浓缩液，混匀。将样品置于 4 ℃ 下密封避光保存以备流式细胞仪分析。

注意：此法并不适用于甲醛固定的样品。在根据 Sasaki 等人的方法（ Cytometry 8:413,1987 ）用 PE 标记的抗体对样品进行染色时可以适用此方法。然而，由于 PI 和 PE 的发射光谱的广泛交迭，因此本方法适于用 7- 氨基 - 放线菌素 D 将死细胞加以区分。