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流式细胞计PI染色死细胞

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PI能够插入双链DNA中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。


Ⅰ、材料


1、PI(e.g.,Cat #537059,Calbiochem,San Diego,CA)


2、缓冲体系:1×PBS(Ca2+ and Mg2+ free,e.g.,Cat#9240,Irvine Scientific,Santa Ana,CA)+2%新鲜小牛血清+0.1%叠氮钠


A、 PI缓冲液


用缓冲液将PI溶解至终浓度为1mg/ml中,于4℃下密封避光保存1个月。


B、 PI浓缩液


用缓冲液将PI溶解至终浓度为500mg/ml,于4℃下密封避光保存。我们已经检测过将PI浓缩液放置数月后,并无观察到染色活性的丢失。


Ⅱ、方法:


将样品细胞按程序描述的方法用FITC标记的单克隆抗体进行单色染色。


A、 在最后的洗涤步骤后,将样品细胞悬浮于PI缓冲液中,于4℃下密封避光保存以备通过流式细胞仪分析;


B、 在最后的洗涤步骤后,如前述将样品细胞悬浮后备用。如果您想检测样品细胞活力,在每一管中加入2μl的PI浓缩液,混匀。将样品置于4℃下密封避光保存以备流式细胞仪分析。


注意:此法并不适用于甲醛固定的样品。在根据Sasaki等人的方法(Cytometry 8:413,1987)用PE标记的抗体对样品进行染色时可以适用此方法。然而,由于PI和PE的发射光谱的广泛交迭,因此本方法适于用7-氨基-放线菌素D将死细胞加以区分。

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