染色体Q显带技术

一、原理

Q显带技术早在1970年为Caspersson及其同事们首先用荧光染料染制染色体标本，在荧光显微镜下这些染色体呈现暗亮不同的条纹，为此有些学者（Coming等，1975，1978；Miller等，1973）认为主要是由于染色体中DNA内的AT丰富区对喹吖因荧光有增强作用，故显出亮带；反之，其DNA内CG丰富区对喹吖因荧光有减弱作用，故而出现暗带。

此外亦有一些学者（Pachman和Riglev,1972, Weisblum和de Haech, 1973）认为是沿着染色体长度所构成的DNA链中的碱基组成分的变化，以及染色体内蛋白质-DNA间的相互作用对于染色体上荧光染料的反应不同而呈现不同暗亮的带纹亦起着作用。这些带纹的出现是由于荧光染料所致，故称为Q带。

其非同源染色上的带纹不一致，而同源染色体上的条纹是相同的，为此，可应用这一技术来鉴定和识别各条染色体的变异。目前常用的Q带技术是喹吖因荧光染料染色，故又称为QFQ法（Q-band by Fluorescence using Quinacrine）。Q带条纹与G带相同，即Q带亮区为G带的深染区，反之，Q带暗区为G带浅染区。

1. 常规染色体制片，制片要求同G带

2. 将玻片浸于PH6.0的磷酸缓冲液中或柠檬缓冲液中5分钟。

3. 用荧光染料0.005%氮芥喹吖因或0.5%二盐酸喹吖因染色15~20分钟。

4. 流水冲去荧光染色液。

5. 分色：将经荧光染色过的片子放置于PH6.0磷酸缓冲液，或柠檬酸缓冲液，或蒸馏水中分色，每次5分钟，共三次。

6. 最后一次分色后，滴上PH6.0磷酸缓冲液，或柠檬酸缓冲液，或蒸馏水，用干净盖玻片盖上（注意不要有气泡），然后用指甲油或石蜡油于盖玻片周围封固，以防水分蒸发。

7. 制好玻片放置于荧光显微镜下观察，并用显微照相拍下所需的中期染色体图象，以便作核型分析。

1. 荧光染料染色之后，分色时间要掌握正确，这是关系到Q带是是否清楚的关键，如果荧光太弱，可以小心取下盖玻片再用荧光染料重新染色，再依次分色，封片。如果荧光太强，带型不清楚，则去掉盖玻片，可再次放置于缓冲液中再分色一分钟。

2. Q带的片子，片龄时间不能太长，一般在一周之内。

3. 带荧光染色片子经褪色之后，仍可作G带染色用。荧光褪色可放于PH6.0缓冲液中浸泡12~24小时后晾干，备用。

4. 使用荧光显微镜，根据光源可分直落式和透射式二种。一般以直落式为好，因为直落式光源来自于目镜和接物镜之间，而通过接物镜落于标本上，对眼睛的损害较少，其光源能发挥最大作用，故在荧光显微照相上，摄片上效果较佳。

5. 荧光显微镜所用光源用HBO 220W高压汞灯，BG12激发滤片和510 mm 栅栏滤片配合可得较佳效果。