筛选shRNA跑q跑不出来怎么办

cubeamy1905

2022-10-10

12孔板，3T3细胞，转染试剂：lipo3000，按说明书上添加量，每孔2ul lipo3000,2ul P3000， 2.5ug cDNA，转染时间24小时，trizol法提RNA，逆转录和qPCR试剂盒做别的样品没问题。qPCR结果空白组没问题，转染组包括NC组跑出来的结果要么CT值很高，要么直接跑不出来（同样品的内参也是一样）。引物没问题，溶解曲线很正常。请问这是怎么回事呢？

2 个回答

balalaLy

2022-10-12

有帮助

有可能是shRNA不行，重新再找一条

毛利小五郎的徒弟

2022-10-11

有帮助

测序是通用引物对吧？载体是切完有胶回收过么？酶切和连接体系都是实验室公用的protocol么？退火的条件可以参考一下质粒的说明书然后用pcr仪做，那个温控准确一点。si严格意义上并不能取代sh，毕竟是个瞬时的东西