【求助】关于promoter 活性问题及蛋白半衰期问题

tsfkyh wrote:
做的目的蛋白，用药物处理后蛋白水平明显增高，想在转录水平研究一下，药物处理后，相应的核转录因子受体与目的基因启动子序列上元件结合。做了报告基因载体想检测目的基因启动子活性，但做了几次基本没有变化，我想知道这是由于哪种原因造成的? 使用的EL4细胞做的转染，文献报道过的，都是使用这种细胞研究白介素5的启动子活性的。
我使用的启动子片段大小为-1275~+45，目前我怀疑可能我所用的启动子片段中可能含有某种抑制元件存在，从而抑制了药物处理后启动子活性的提高，缩短启动子片段来看一下能否有效果。有了解这方面的大侠请多给点建议，，谢谢
还有，我想做一下il5蛋白半衰期的研究，打算用CHX 处理，时间点不知如何设计？请大侠们帮忙@

tsfkyh wrote:

2、还有一种可能：该基因调节受增强子的影响，增强子的位置可以离目的基因很远，而你的启动子序列中没有该增强子序列。
设计的启动子序列中包含该基因表达的所有的必须得元件（文献中报道过的）