【求助】关于cullin4a蛋白的问题
丁香园论坛
1526
我想通过western来观测cullin4a蛋白质在小鼠胚胎成纤维细胞中的表达情况，可是做了很多次的western，条带不出的时候居多，即使出了，条带的大小与目的条带的大小也不一样，要比目标带小20KD左右，cullin4a主要功能是参与蛋白质的泛素降解，会不会是因为蛋白质降解了所以条带变小或是此带是非特异性的条带，想请教一下对cullin4a蛋白了解的高手指点一下，不胜感激！
jingjingyufu wrote:
要比目标带小20bp左右
是不是KD............
定的一抗是多抗吗，既可做人的，也可以做鼠的。。
人的cullin 4A 有两个转录本，isoform 2为659aa。
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/11140811?report=GenPept
小鼠的cullin 4A为614aa。
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/22164790?report=GenPept
可能的问题：说明书是人的cullin 4A，而你是做小鼠的，所以分子量要小一些。
请把抗体说明书传上来看看。
人的cullin 4A 有两个转录本，isoform 2为659aa。
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/11140811?report=GenPept
小鼠的cullin 4A为614aa。
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/22164790?report=GenPept
可能的问题：说明书是人的cullin 4A，而你是做小鼠的，所以分子量要小一些。
请把抗体说明书传上来看看。
不好意思，是KD，打错了，说明书是人和鼠的都可以
看不到PAGE啊。。。多少KD是哪里看到的？
这个蛋白的分子量是做双向电泳找出来的差异点，在公司所给的数据上有显示，它是87697.5Da，查别的公司的抗体说明书（只用于人的），告诉是88KD，我还有一个问题，我找的鼠的cullin4a的氨基酸是759，而你发给我的是614aa,为什么会差这么多？谢谢版主一直耐心的回复。
614是isoform 2，isoform 1确实是759。
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/57165424
1 AA≈100 道尔顿，推算小鼠的约60KD，应该是你所要的条带。
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/57165424
1 AA≈100 道尔顿，推算小鼠的约60KD，应该是你所要的条带。
本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴
师兄微信号：shixiongcoming
