细胞免疫荧光步骤需要注意的问题？

（1）固定剂的选择：看实验蛋白在细胞哪个位置表达选择相应的固定剂，3.7%-4% 的甲醛或多聚甲醛是常用的固定剂，适用于绝大多数蛋白；

（2）通透剂的选择：一般使用 0.1%-0.2% 的 Triton-X100，而选择甲醇固定一般无需再通透，若蛋白不在细胞膜上表达则不需要通透处理；

（3）细胞铺板的密度要合适，不要太密（镜下细胞一个连一个不行），也不要太稀（镜下有屈指可数的细胞不行），细胞密度以达到 75%-85% 为佳；

（4）二抗孵育及后面的操作步骤注意避光；

（5）洗涤动作要轻柔，每次洗涤时间为 5 min 左右。