细胞免疫荧光步骤

免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。

实验材料

1.　 细胞样品

2. 试剂、试剂盒

多聚甲醛 70% 甲醇 丙酮 PBS Triton BSA DAPI 染液 DABCO Tris 甘油

3. 仪器、耗材

玻片

实验步骤

1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用 PBS 浸洗 3 次，每次 3 min；

2. 用 4% 的多聚甲醛固定爬片 15 min， PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3 min；

3. 0.5%Triton X-100(PBS 配制) 室温通透 20 min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；

1. 加荧光二抗： PBST 浸洗爬片 3 次，每次 3 min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中 20～37℃ 孵育 1 h，PBST 浸洗切片 3 次，每次 3 min；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。

2. 复染核：滴加 DAPI 避光孵育 5 min，对标本进行染核，PBST 5 min×4 次洗去多余的 DAPI；