组织化学与免疫组织化学染色标本的石蜡包埋

组织化学与免疫组织化学染色标本常用石蜡切片和冰冻切片。对于柔软的胚胎组织或脑也可用琼脂包埋后振动切片机切片。

用于免疫组织化学染色的石蜡切片(paraffin secdon)与常规HE染色的石蜡切片基本 制片过程相同。石蜡切片的优点是组织结构保存良好，结构清晰，能连续切片，抗原定位准确，更适合回顾性研究。

固定好的组织在切片前要经石蜡包埋封存，而石蜡与水不相溶。故需用乙醇脱去组织内多余水分。脱去水分后组织中的乙醇仍与石蜡不相溶，故还需用二甲苯替换乙醇。并使组织透明，然后经透明的组织人熔化的石蜡中浸透，最终包埋和切片。其基本步骤如下：

常用梯度乙醇溶液作为脱水剂，脱水的时间长短与组织块的大小和结构有关。用于HE染色的组织标本脱水时，可以在?0％或80％乙醇中长期保存，90％乙醇4小时一95％乙醇4小时一100％乙醇1 2小时一100％乙醇Ⅱ2小时。

用于免疫组织化学染色的组织块脱水和透明均应在4~C下进行，以减少组织抗原的损失，此外不能在70％乙醇中长时间浸泡。脱水过程是：70％乙醇3～4小时一30％乙醇3―4小时一90％乙醇2～3小时一95％乙醇2―3小时一100％乙醇T1．5～2小时一100％乙醇Ⅱ1．5～2小时。

对于组织块小而柔软的组织还可适当缩短每一步脱水时间，如胚胎组织应从30％乙醇开始脱水，以防止组织变脆。

常用的透明剂是二甲苯，透明的时间长短与组织的大小和结构有关。一般过程是：二甲苯1 0．5～1小时，二甲苯Ⅱ0．5～1小时。应注意脱水和透明的时间一定要充分，否则不利于浸蜡，易使石蜡与组织之间形成夹层而使切片困难。但时间也不能过长，否则组织变得过硬，不便于浸蜡，且易引起切片时脆裂。

经透明的组织人熔化的石蜡中浸透，一般需经3次，每次0.5～1小时，其时间的长短与组织大小和结构有关，可以灵活掌握。浸蜡时间不能过长或不足。其结果与脱水、透明不充分或过长结果相似。用于HE染色的标本浸蜡和包埋的温度可限于65℃，而用于免疫组织化学的标本浸蜡和包埋温度不能高于60℃，否则高温在非缓冲体系下会破坏组织中抗原。因此最好选择低熔点软蜡(56～58℃)。

浸透石蜡的组织块要人新的石蜡中冷却凝固，即包埋(embeding)。包埋时，包埋器中倒人熔化的新蜡，在其凝固之前迅速放人组织块，放人前要分清组织的各个面，将所需断面朝下。包埋有腔组织时，需平放或立放，以获得所需断面。

石蜡凝固后．组织便包封在石蜡内。切片前需把包有组织的蜡块修成一定形状，并且把各个面修平，注意不能把蜡边与组织边靠得太近，也不能太远，近则不易连片，远则废刀。在修块时选适当的地方做标记，便于日后辨认。