电镜组织化学技术基本原理

电镜组织化学 技术是在光镜组织化学基础上发展起来的形态学研究技术，它将组织化学与电镜技术相结合，使组织化学研究从光镜微细结构水平发展到电镜超微结构水平。

电镜组织化学技术将组织细胞中特定的化学成分通过特定的化学反应形成反应产物，然后使其形成电镜下易于观察的高电子密度不溶性沉淀物，从而在超微结构水平对特定化学成分进行原位分析，由此将生物化学与超微结构有机联系起来，显示组织细胞内各种固有化学成分的定位。

电镜组织化学技术主要检测一些酶的活性及其在超微结构的定位。虽然目前已知酶的种类超过2200余种，但电镜组织化学能显示的不超过100种。

一、酶组织化学反应过程

欲观察某些酶类在细胞内的分布，可通过酶的细胞化学反应显示酶的存在部位，即在一定条件下，利用细胞内的酶作用于相应底物的特性，使酶与底物在酶所在部位形成中间复合体，即易溶于水的酶反应产物(也称初级反应产物)，此过程系酶作用于底物的酶反应过程，为特异性反应；

当捕捉剂，如电子供体等存在时，该中间复合体迅速转变成不溶的沉淀物(也称最终反应产物)，此阶段为捕捉反应，为非特异性的，形成的终产物经适当处理可在电镜下进行定性定位分析。

二、酶反应底物的特异性

一般认为酶作用的底物具有较严格的选择性。这也是酶细胞化学反应的基础，所以实验中应尽量保证酶反应的特异性。常用的方法包括：

1．在孵育液中加入非特异性酶的抑制剂，除去不相关的酶反应。

2．选择特异性较强的专一底物。

3．选择酶的最适pH，如酸性磷酸酶和碱性磷酸酶虽然作用底物相同，但是，两者的最适pH不同，所以通过选择最适pH可获得较特异的酶反应。

三、捕捉反应

电镜酶组织化学常用的捕捉反应为金属盐沉淀法和嗜锇性物质生成法两种。

1．金属盐沉淀法 其原理是使酶反应所生成的易溶性初级反应产物与重金属结合，形成难溶的终产物，即高电子密度的沉淀物。常用的重金属有铅、铜、钡和铈等。

2．嗜锇性物质生成法 基本原理是使酶反应产生嗜锇性终产物，后者经OsO4 固定，形成高电子密度的锇黑，电镜下容易识别。

电镜酶组织化学结果的判断应从细胞超微结构、反应产物电子密度的强弱、分布定位是否准确等方面综合分析。良好的染色应该是酶细胞化学反应产物的定性、定位明显而准确，电子密度均匀、颗粒细密。如果出现定位不准确或反应产物不同程度的弥散，则为人工假象．需尽力避免。