电镜实验

电子显微镜是用电子束和电子透镜代替光束和光学透镜，使物质的细微结构在高放大倍数下成像的仪器，通过电镜可以直接观察到原子像，分辨率可达到 0.5-3 nm。

但电子显微镜需要在真空条件下工作，很难观察活的生物，生物样品也会因电子束照射受到辐射损伤。常用的电子显微镜有透射电镜（可观察细胞和组织内部超微结构以及生物大分子、微生物的全貌，分辨率高）和扫描电镜（可用于观察生物样品的各种形貌特征，获得的图像立体感强）。

机体细微结构成像

盖玻片；2.5% 戊二醛；0.1M 磷酸缓冲液；30% 乙醇；50% 乙醇；70% 乙醇；80% 乙醇；95% 乙醇；100% 乙醇；载网；透射电镜；扫描电镜。

以扫描电镜为例：

1、取材，组织块一般长宽小于 10 mm,高度小于 5 mm,细胞、真菌等附着性样品直接培养在盖玻片上（ 5 mm× 5 mm大小玻片），血液或组织液直接在盖玻片上制成涂片；

2、固定、清洗，4℃ 2.5%戊二醛固定 ≥1.5h,固定好后用 0.1M 磷酸缓冲液漂洗 20min/次、三次；

3、脱水，30% 乙醇 冰上 5min；50% 乙醇 冰上 5min；70% 乙醇 4℃ 过夜；80% 乙醇 冰上10min；95% 乙醇 冰上 15min ；100% 乙醇冰上 15min 两次；

4、临界点干燥；

5、 喷金；

6、 电镜观察、拍片

1、样品处理过程中，70% 乙醇中可长时间停留，其他步骤尤其 100% 乙醇中不可长时间停留，以免脱水过度；

2、样品临界干燥前要泡在 100% 乙醇中，不可暴露于空气中。

1、临界干燥的条件是什么？

将样品置于临界干燥器中，浸泡于液态二氧化碳中，加热到临界点温度（31.4,72.8 个大气压）以上，使之气化干燥。

2、脱水后样品为何仍需临界干燥？

样品脱水后，水是脱掉了，但有机溶剂占据了原本水的位置，还需在表面张力尽可能小的情况下将有机溶剂除去，使样品真正干燥。