显微切割技术

一、显微切割技术出现的背景

在分子病理学研究中，常常遇到两个比较棘手的问题：

一是选取的研究材料需要在某一方面具有相同的特征，即具有一定程度的同质性。我们人体的各种组织绝大多数是由多种不同细胞组成的异质性的细胞群，这种选取同质性的研究材料问题在对人体组织的深入研究中常常遇到却又不易解决；

二是随着研究的不断深入需要在组织细胞中分离的研究材料日趋微小，常规手段往往不易做到。

显微切割技术（microdissection technique）可以很好地解决以上问题，因而受到高度重视并得以广泛应用。

二、什么是显微切割技术

1. 定义

显微切割技术是在显微状态或显微镜直视下通过显微操作系统对欲选取的材料（组织，细胞群，细胞，细胞内组分或染色体区带等）进行切割分离并收集用于后续研究的技术。显微切割技术实际上属于在微观领域对研究材料的分离收集技术，因此应用此技术往往是许多要深入的研究工作中起始的重要一步。

2. 显微切割的四个特点：

一是“细微”，由于是在显微状态并采用特殊的分离收集手段，显微切割的对象可以达到微米级，显微切割的精度可以达到毫微米级，因此利用显微切割技术可以分离收集到象核仁和包涵体及染色体特异区带这样细微的对象；

二是“原位”，利用显微切割技术是在组织细胞或染色体的原位取材，因此所取材料的定位清楚，所研究对象的历史背景明确。

三是“同质”，显微切割技术可以保证所取材料一定层次上的同质性。

四是“结合”，显微切割技术可以与多种分子生物学、免疫学及病理学技术结合使用。

正是由于显微切割技术具有上述特点或者称为优势，其在分子病理学研究中的应用十分广泛。

3. 显微切割的方式

依其发展的过程可以分为以下四种：手动直接显微切割、机械辅助显微切割、液压控制显微切割和激光捕获显微切割（Laser Capture Microdissection）。

A、手动直接显微切割是早期的切割方式，它是直接在显微镜下手持切割用针分离组织或细胞群，此种方式切割精度低，只适用于对较大块组织中的局部区域或细胞群进行分离，切割单个细胞十分困难；

B、机械辅助显微切割是利用普通光学显微镜的微调旋钮控制切割针切割细胞，可采用30G1/2注射用针替代需要专用拉丝设备制作的玻璃切割针，此方式切割精度较手动直接显微切割的精度有了提高，可以达到对较大的单个细胞的切割，而且此方式简单易行低耗，尤其适合于基层和无专用设备的单位，但由于显微镜的微调旋钮只能进行二微控制，对切割后的细胞进行收集较为困难，且切割精度仍然较低；