【交流】CD31免疫荧光图片

有好几个同仁发消息问CD31染色，刚工作比较忙，今天分享一下
我做的是免疫荧光，也试做过免疫组化，都可以做出来

抗体：小鼠抗CD31单克隆抗体 英国Abcam公司（CD31抗体说明书里面有说多聚甲醛会掩盖抗体，所以推荐速冻切片，也尝试过速冻切片，不使用多聚甲醛，但是这个技术个人掌握不好，所以还是用了多聚甲醛固定）

二抗：

特别说明：我是从同学那里得到的经验，可能绿光稍微好做些，之前做红光做不出来，后来也没有尝试。

步骤：
(1)水化
(2)抗原修复：枸橼酸(PH = 6.0)溶液中，微波炉中火5 min后，室温冷却30 min，0.01M PBS漂洗5 min×3次。
(3)破膜：50 μl的0.2% Triton X - 100，室温静置30 min，0.01M PBS漂洗5 min×3次。
(4)封闭
(5)孵一抗：滴加一抗(血管密度检测为: CD31 1:200)，每张脑片50 μl，置于4℃冰箱过夜(15 h)。
(6)复温
(7)孵二抗：50 μl的山羊抗小鼠488(1:1000)，室温孵育60 min，0.01M PBS漂洗5 min×6次。
(8)染核及封片：滴加抗荧光淬灭剂(内含有细胞核染色剂DAPI))，加盖盖玻片并防止气泡，荧光显微镜下观察。

之前第一次做的时候在丁香园发的帖子http://www.dxy.cn/bbs/topic/24776451，这个里面做的不是正在的CD31，所以不要参考，下面回帖里面有个clifford老师提供的图片是正在的CD31。

看下面的图