m6A研究又有新手段了？赶紧来了解一下吧！

RNA 甲基化 m6A 是如今的研究热点之一，目前主要的研究思路包括差异表达的 write，reader 和 eraser 基因分析；m6A 抗体检测全转录组甲基化水平；分析 m6A甲基化水平变化的靶基因和下游机制研究。而在 7 月 25 日的 Cell 上新发表了一篇介绍不使用 m6A 抗体的检测 mRNA m6A 水平的 Resource 文章，小编第一时间和大家分享一下。

作者开发这一方法的前提是有研究报道了 MazF 能特异性的识别无修饰的 ACA 序列并发挥 RNA 酶活性在 ACA 之前剪切底物。但 ACA 序列的第一个 A 发生 m6A 甲基化之后将无法被 MazF 所识别。

MazF RNA 酶作用示意图

根据这一原理，作者将纯化后的 mRNA 进行 MazF 酶处理，然后再对打断的 RNA 进行逆转建库测序。对于无修饰的位点，ACA 处被完全剪切，测序 reads 正好分布于该位点上下游而且比对至该处的上下游 reads 数是相同的。而甲基化位点的 reads 会包含上下游的序列。作者开发了 MAZTER-MINE 软件包专门进行分析。

MAZTER-Seq 实验流程图

MAZTER-MINE 分析 m6A 示意图

接下来作者便是要验证这一新方法的可行性了。在酵母中敲除 IME4 的情况下，检测到的剪切效率显著高于野生型（剪切效率高代表低 m6A 水平），m6A 抗体富集后的样品剪切效率也显著低于未富集的 Input 组。整体水平可靠，那检测的特异性位点是否准确呢？作者也将该方法检测到的新甲基化位点使用放射标记层析检测，发现预测的位点准确存在而且与剪切效率相符合。作者则是与 m6A 抗体 IP 的方法进行了比较，也证实了这一方法的可行性。

MAZTER-Seq 检测结果验证

MAZTER-Seq 与 m6A-Seq 比较分析

此外，后文中作者也在大规模的 CRISPR-Cas9 改变 m6A 状态和酵母减数分裂模型中检测了 MAZTER-Seq 这一系统；并进一步通过这一方法检测了哺乳动物不同细胞间 m6A 水平的保守性；也探究了去甲基化酶 FTO 对整体 m6A 甲基化水平的影响等。这里小编主要给大家分享这一新技术，其他部分暂不过多分析了。新的技术能大大拓展我们的研究内容；对于这一技术，不知大家怎么看呢？