抑制荧光蛋白检测时的异质性

器材：

① 一台荧光激活细胞分选仪及分析系统（可选）；

② 真核荧光蛋白表达载体系统（例如，BD clontech 公司帕罗奥图，加州 Living Colors 载体）；

③ 限制性内切酶和缓冲液，大肠杆菌宿主株（如 HB101），培养基（如 LB）和氨苄青霉素；

④ 细胞：Jurkat，P19 胚胎瘤（EC）及 HEK293；

⑤ 培养基：RPMI 1600 用于 Jurkat 细胞；DMEM 用于 P19 和 HEK293 细胞；

⑥ 电穿孔仪器和样品槽（如 Bio-Rad 公司产品，海格立斯，加州）；

⑦ 白炽灯光源（如光纤灯等）；

⑧ 固定剂（如多聚甲醛）。

试剂:

① 磷酸钙（CaPO₄）转染试剂：250 mM CaCl₂，2X HBS（280 mM NaCl，50 mM N-（2-羟乙荃）哌嗪-N-2-乙磺碱（HEPES），1.5 mM Na₂H₂PO₄，pH7.1），无菌水；

② 标准细胞培养试剂和添加剂；

③ Geneticin（G418）（Invitrogen 公司，尤尔斯巴德，加州）；

④ DNA 染料（如 Hoechst 33342）。

抑制荧光蛋白检测时的异质性实验基本过程可分为以下几步：

A. 要确保实验中使用的诱捕载体表达 EGFP 不形成融合蛋白而导致细胞内分布异常。

B. 调整流式分选的参数。可以降低检测管中的流速，在光子收集过程中旋转细胞。这样的目的是使从各个方向收集的细胞具有平均荧光强度，与细胞上 EGFP 蛋白的表达相一致。这两个改进很大程度上提高了指定窗口内的细胞收集和测定的准确性。借助这些改进，当前的技术可以保证足够准确地进行荧光「窗口」细胞群的多元筛选。