【求助】研究信号通路时,如何使用抑制剂?
丁香园论坛
10078
我的药物现在已经证明能够减轻abeta诱导的细胞毒性。并且能够降低abeta诱导的JNK和p38 MAPK的磷酸化。
我想接着用JNK和p38的抑制剂进行验证。但是不知道实验怎样设计?
我的初步设想是:
Group 1: 空白对照
Group 2:abeta损伤组
Group 3:abeta+药物 (低浓度)
Group 4:abeta+药物 (中浓度)
Group 5:abeta+药物 (高浓度)
Group 6:abeta+JNK抑制剂
Group 7:abeta+p38抑制剂
我看有的文章上还增加了:abeta+药物+JNK抑制剂 以及 abeta+药物+p38抑制剂,不知道这样设计的目的是什么?3种药物可以同时加吗?
我想接着用JNK和p38的抑制剂进行验证。但是不知道实验怎样设计?
我的初步设想是:
Group 1: 空白对照
Group 2:abeta损伤组
Group 3:abeta+药物 (低浓度)
Group 4:abeta+药物 (中浓度)
Group 5:abeta+药物 (高浓度)
Group 6:abeta+JNK抑制剂
Group 7:abeta+p38抑制剂
我看有的文章上还增加了:abeta+药物+JNK抑制剂 以及 abeta+药物+p38抑制剂,不知道这样设计的目的是什么?3种药物可以同时加吗?
magichunter wrote:
我的药物现在已经证明能够减轻abeta诱导的细胞毒性。并且能够降低abeta诱导的JNK和p38 MAPK的磷酸化。
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我看有的文章上还增加了:abeta+药物+JNK抑制剂 以及 abeta+药物+p38抑制剂,不知道这样设计的目的是什么?3种药物可以同时加吗?
我的理解是:
一、首先前五组做WB很好说明问题,abeta+药物+JNK抑制剂 以及 abeta+药物+p38抑制剂这个是个间接证据,如果JNK和p38抑制+药物组的效果大过药物组和JNK,p38 inhibition组,说明药物不是通过抑制这两个激酶起效的。
进一步地可以这样想,假设药物只通过JNK,p38发挥作用,那么当两者受到抑制后,有无药物效果都一样;但如果JNK和p38抑制+藥物組作用比只抑制JNK,p38的作用大则说明药物可能还通过其它途径发挥作用。
二、这里加抑制剂的两组Group 6:abeta+JNK抑制剂 Group 7:abeta+p38抑制剂 可用于说明
(1)abeta通过p38/JNK发挥细胞毒性作用
(2)与abeta+药物+JNK抑制剂 以及 abeta+药物+p38抑制剂组作对比,看药物除了通过降低abeta诱导的JNK和p38 MAPK的磷酸化发挥作用外,是不是可能还有别的途径(写成Discussion就是:药物发挥作用的机制除通过降低abeta诱导的JNK和p38 MAPK的磷酸化以外,可能还有其它途径)
三、abeta+药物+抑制剂的处理
我认为:三者应该不是同时加。
正如你前面的分组
Group 3:abeta+药物 (低浓度)
Group 4:abeta+药物 (中浓度)
Group 5:abeta+药物 (高浓度)
Group 6:abeta+JNK抑制剂
Group 7:abeta+p38抑制剂
当中药物或抑制剂应该是加在abeta之前,用以完全阻断abeta诱导的p38MAPK和JNK的磷酸化及其导致的效应一样。在这里三个药物相加是有顺序,分开进行的。加入的量和时间应该参照3--7的设计(因为药物和抑制剂各有各的起效时间),再作比较。
四、这个实验设计方案比较复杂,要检测和对比的地方比较多。在陈述设计思路和发表论文的时候可能要注意discussion部分的逻辑性,如果能理清步骤,图文并茂地说明,将更好说明你的想法和结论。
不知道这样的解释对不对,虚心听取其他战友的意见,相互学习!
上面的“细胞因子”分析的相当不错,不过我想说明的是,你的问题开始提到:“我的药物现在已经证明能够减轻abeta诱导的细胞毒性。并且能够降低abeta诱导的JNK和p38 MAPK的磷酸化”,既然已经证明了相关的作用与通路,现在设计这样的实验有意义吗?相信对于a-beta蛋白的毒性与JNK,p38磷酸化水平的关系早有定论,在这里完全不用设计这样的实验了;另外,你的药物如果是同时可以抑制JNK与p38的活性,它的作用应该比单用一种JNK或p38的作用要强,这也不用比较了。
总体感觉,这个实验设计的意义不大,你还不如观察药物是否可以引起促细胞存活的因素入手进行实验,不要再困于JNK和p38了,它们仅是两个激酶而已,细胞的存活有两种力量的平衡来决定的,即促死活因素的降低与促存活因素的加强;
总体感觉,这个实验设计的意义不大,你还不如观察药物是否可以引起促细胞存活的因素入手进行实验,不要再困于JNK和p38了,它们仅是两个激酶而已,细胞的存活有两种力量的平衡来决定的,即促死活因素的降低与促存活因素的加强;
你们分析的都很有道理 学习了
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