树突状细胞的吞噬功能检测

最新修订时间：2022-02-10

简介

树突状细胞（dendritic cell，DC）是目前公认的体内功能最强大的专职抗原提呈细胞（professional antigen presenting cell，APC），在免疫应答的首要环节--抗原提呈过程中扮演着重要的角色，是唯一能够活化初始 Th 细胞的 APC，成为适应性免疫应答的始动者；同时，DC 也在诱导机体的免疫耐受中发挥重要作用。在免疫稳定状态下，分布于外周非淋巴组织的 DC 处于非成熟状态，主要功能为识别和摄取抗原。

与其功能相适应，非成熟 DC 表面表达低水平的 MHC II 类分子和共刺激分子，高表达一系列受体以便于识别与病原体相关的物质，包括多种 Toll 样受体（Toll like receptor，TLR），C 型凝集素如甘露糖受体、DEC205 等。一旦发生感染或组织损伤，非成熟 DC 就会向炎性部位迁移，摄取加工抗原，并释放大量的炎性因子，激发天然免疫应答，避免感染的扩散。

相应地，非成熟 DC 发生了一系列的变化，获得了成熟表型及功能：

① 丢失用于吞噬的受体；

② 高表达 MHC II 类分子和共刺激分子，包括 CD40、CD80 和 CD86；

③ 形态发生改变；

④ 启动抗原处理机制，包括溶酶体相关的膜蛋白（DC-LAMP）的水平增加。同时，成熟 DC 的趋化因子受体表达谱发生变化，CCR1、CCR5 和 CCR6 等的表达降低，而 CCR7 的表达会增高，从而促使 DC 从外周组织沿传入淋巴管迁移至邻近的次级淋巴组织，与初始 T 细胞相遇，诱导其活化并增殖成为抗原特异性的效应 T 细胞，从而启动免疫应答。因此，DC 在非成熟期和成熟期的表型和功能各不相同。

原理

树突状细胞的吞噬功能检测的基本原理是 DC 在非成熟期具有较强的吞噬功能，而成熟 DC 的吞噬功能减弱，因而 DC 吞噬功能的变化通常可作为检测 DC 成熟程度的重要指标之一。

材料与仪器

试剂：

（1）待测细胞悬液，浓度 2 x 10 个/ml。

（2）荧光素标记的大分子蛋白质，如 BSA-FITC。

（3）预冷 PBS。

仪器：

流式细胞仪

步骤

树突状细胞的吞噬功能检测的基本过程可分为以下几步：

（1）准备 3 支 1.5 ml 离心管，每管中加入 2 x 10 个/ml 细胞悬液 50 μl，做好标记。

（2）在其中两管分别加入荧光素标记的大分子蛋白质（如 BSA-FITC）200 mg/ml，避光，将其中一管放入冰水混合物中，作为阴性对照，另外一管置于 37 ℃，孵育 3 小时。

（3）每管加入 1 ml 预冷 PBS，1500 g 离心 3 分钟。迅速倒掉上清后，手指轻弹管底，使细胞沉淀变松。

（4）每管加入 1 ml PBS 后，移入流式检测专用试管中，4 ℃ 避光待检（可保存＜4 小时）。

（5）用流式细胞仪进行检测，分析各组 FITC 平均荧光强度来反映其吞噬功能的强弱。

来源：丁香实验