提问
提问
我要登录
|免费注册
点赞
收藏
wx-share
分享

树突状细胞的吞噬功能检测

相关实验:树突状细胞表型和功能检测

最新修订时间:

简介

树突状细胞(dendritic cell,DC)是目前公认的体内功能最强大的专职抗原提呈细胞(professional antigen presenting cell,APC), 在免疫应答的首要环节--抗原提呈过程中扮演着重要的角色,是唯一能够活化初始 Th 细胞的 APC,成为适应性免疫应答的始动者;同时,DC 也在诱导机体的免疫耐受中发挥重要作用。在免疫稳定状态下,分布于外周非淋巴组织的 DC 处于非成熟状态,主要功能为识别和摄取抗原。

与其功能相适应,非成熟 DC 表面表达低水平的 MHC II 类分子和共刺激分子,高表达一系列受体以便于识别与病原体相关的物质,包括多种 Toll 样受体(Toll like receptor,TLR),C 型凝集素如甘露糖受体、DEC205 等。一旦发生感染或组织损伤,非成熟 DC 就会向炎性部位迁移,摄取加工抗原,并释放大量的炎性因子,激发天然免疫应答,避免感染的扩散。

相应地,非成熟 DC 发生了一系列的变化,获得了成熟表型及功能:

① 丢失用于吞噬的受体;

② 高表达 MHC II 类分子和共刺激分子,包括 CD40、CD80 和 CD86;

③ 形态发生改变;

④ 启动抗原处理机制,包括溶酶体相关的膜蛋白(DC-LAMP)的水平增加。同时,成熟 DC 的趋化因子受体表达谱发生变化,CCR1、CCR5 和 CCR6 等的表达降低,而 CCR7 的表达会增高,从而促使 DC 从外周组织沿传入淋巴管迁移至邻近的次级淋巴组织,与初始 T 细胞相遇,诱导其活化并增殖成为抗原特异性的效应 T 细胞,从而启动免疫应答。因此,DC 在非成熟期和成熟期的表型和功能各不相同。

原理

树突状细胞的吞噬功能检测的基本原理是 DC 在非成熟期具有较强的吞噬功能,而成熟 DC 的吞噬功能减弱,因而 DC 吞噬功能的变化通常可作为检测 DC 成熟程度的重要指标之一。

材料与仪器

试剂:

(1)待测细胞悬液,浓度 2 x 10 个/ml。

(2)荧光素标记的大分子蛋白质,如 BSA-FITC。

(3)预冷 PBS。

仪器:

流式细胞仪

步骤

树突状细胞的吞噬功能检测的基本过程可分为以下几步:

(1)准备 3 支 1.5 ml 离心管,每管中加入 2 x 10 个/ml 细胞悬液 50 μl,做好标记。

(2)在其中两管分别加入荧光素标记的大分子蛋白质(如 BSA-FITC)200 mg/ml,避光,将其中一管放入冰水混合物中,作为阴性对照,另外一管置于 37 ℃,孵育 3 小时。

(3)每管加入 1 ml 预冷 PBS,1500 g 离心 3 分钟。迅速倒掉上清后,手指轻弹管底,使细胞沉淀变松。

(4)每管加入 1 ml PBS 后,移入流式检测专用试管中,4 ℃ 避光待检(可保存<4 小时)。

(5)用流式细胞仪进行检测,分析各组 FITC 平均荧光强度来反映其吞噬功能的强弱。

来源:丁香实验

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序