吞噬细胞吞噬功能检测(Assay of the Phagocytic Function of Phagocyte)
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吞噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化的功能,在机体固有免疫 中发挥重要作用。 小鼠腹腔内注射硫代乙醇酸钠,可刺激巨噬细胞的聚集。四日后小鼠腹腔内注入羊红细胞悬液,一小时后解剖收集腹腔吞嗜细胞,染色、镜检可观察对羊红细胞的吞嗜现象。通过计算吞嗜百分比或吞噬指数可测定吞噬细胞的吞嗜功能。
二、材料
1. ICR品系小鼠(北京大学 医学部实验动物中心提供)
2. PBS 缓冲液
3. 3%硫代乙醇酸钠
4.羊红细胞(1%悬液,北京大学医学部实验动物中心提供)
5. 解剖器材、注射器、尖吸管、橡皮吸头、小试管及载玻片、
6. 瑞氏染液、甲醇
三、实验方法
1. 实验准备:用无菌注射器吸取3%硫代乙醇酸钠3ml,注射于小鼠腹腔内。
2. 四日后,注射羊红细胞(1%悬液)1ml于小鼠腹腔内。
3. 注射1小时后,将小鼠用颈椎脱臼法处死,解剖暴露腹腔,于腹腔靠上部位,用镊子轻轻夹起腹膜,将腹膜剪一小口,用尖吸管注入5ml预温的PBS,同时用手反复揉搓腹腔约1—2分钟,以便尽可能多地冲洗出小鼠腹腔的吞噬细胞。
4. 用尖吸管吸取腹腔液,置一洁净试管内。
5. 用尖吸管将腹腔液吹打均匀(尽量避免产生气泡),吸取一滴滴于载玻片上,加盖玻片镜检。
6. 观察结果,也可以将腹腔液涂片,平放于湿盘内,37℃,孵育30分钟。取出涂片,用预温的PBS冲洗3次,然后用甲醇固定1分钟,以瑞氏染液1份加pH6.4的PBS 2份混匀后,滴于涂片上染色5-10分钟,以蒸馏水冲洗(切勿先将染液倾去)后,待干,镜检。
四、实验结果
观察小鼠腹腔巨噬细胞和中性粒细胞对羊红细胞的吞噬现象,计算吞噬百分比,即每100个吞噬细胞中吞噬有羊红细胞的细胞数。也可用吞噬指数表示,即将100个吞噬细胞中所吞噬羊红细胞的总数除以100。吞噬百分比和吞噬指数一般是平行的。
五、注意事项
(1) 充分揉搓腹腔,尽可能将吞噬细胞冲洗下来。
(2) 用尖吸管吸取腹腔液时,尽量避开腹腔脏器,避免损伤血管引起出血,影响实验结果。
(3) 用瑞氏染液染色时,切勿先将染液倾去后再冲洗,以免染液中细小颗粒附着于玻片上影响标本的清晰度