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使 用 其 他 佐 剂 制 备 多 克 隆 抗 体 的 免 疫 接 种 法

相关实验:多克隆抗血清的制备

最新修订时间:

材料与仪器

步骤

用 其 他 佐 剂 制 备 多 克 隆 抗 体 的 免 疫 接 种 法

附 加 材 料(其他材料见基本方案)

TiterMaxttR-I (CytRx; 4°C 下储存少于 24 个月)或 Ribi 佐 剂 系 统(RAS; RibiImmunoChem; 储 存 于 2〜8°C 但不冷冻)

Iml 塑料吸管

40〜45°C 水 浴 ,仅 用 于 RAS 佐剂

la. TiterMax: 用 TiterMax 佐 剂 乳 化 房 水 抗 原(见基本方案,步 骤 1〜3),但在步骤 2中使用〇.5 ml 抗原和一个 0 •5 ml TiterMax 管形瓶和在步骤 3 中 使 用 Iml 塑料注射器(使 用 TiterMax 佐剂时不要使用玻璃注射器)。此 Im l 抗原-佐剂乳化液能够免疫 2 0 只小鼠、 1 0 只家兔或 1 只山羊。 4°C 、一 20°C 或一 70°C 下储存未用的乳状液。如需要,使用前重新乳化。

lb. Ribi 佐剂系统: 40〜45°C 水浴加热含有 RAS 的 管 形 瓶 5〜lOmin。用 一 个 3m l 含有21 G 针头的注射器直接穿过橡皮塞向瓶中加入含有 2 ml 抗 原 的 PBS 液 。将管形瓶盖上盖子,室温条件下,剧烈振荡 3 min,制 备 2m l 含 有 2 % 角鲨烯油的佐剂-抗原溶液 ,足够免疫 1 0 只小鼠、 2 只 家 兔 或 1 只山羊。 4°C 下储存未使用的乳状液数月。如需要较少量,向管形瓶中加入 1.0 ml PBS, 4°C 下保存,用时,在 此 PBS 液中以 1: I (V/v 的比例混合抗原。

2.转移乳状液至 Iml 注射器中,在注射器上接一个 22 G 的针头,赶走注射器中的气泡。

3.固 定 动 物(附 录 2C),注射佐剂-抗原乳状液。

a. 对 于 TiterMax,在家兔两侧大腿肌内注射 40ul 乳状液 (每只家兔 30〜SOUg 抗原)。

b. 对 于 RAS,给家兔多个部位注射含有 50〜250 ug 抗 原 的 RAS 1.0 ml: 0.05m l 皮内注射于 6 个部位, 0.3 ml 两侧大腿肌内注射, 0.1 ml 颈部皮下注射。

4.对 动 物 采 血(附 录 2F) ,制备抗原以增强免疫(见基本方案,步 骤 6、 7)。

5.在 第 4 、 8 和 1 2 周进行增强免疫。在每一次的增强免疫 10〜14d 后对动物采血,制备 血 清(见辅助方案),检测血清,当达到较高的特异性抗原滴度时终止免疫。

a.对 于 TiterMax,可能不是所有抗原都需要增强。如果需要进行再次免疫,第 4 周时可用可溶性抗原代替抗原-佐剂。若 1 〇 〜14d 后滴度仍然很低,立即给予增强剂量的抗原-佐剂。增加抗原的量可能也有帮助。

b. 对 于 RAS,给予抗原-佐剂增强注射,其频率不要超过每 4 周 1 次 。

来源:丁香实验

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