简介
树突状细胞（dendritic cell，DC）是目前公认的体内功能最强大的专职抗原提呈细胞（professional antigen presenting cell，APC）， 在免疫应答的首要环节--抗原提呈过程中扮演着重要的角色，是唯一能够活化初始 Th 细胞的 APC，成为适应性免疫应答的始动者；同时，DC 也在诱导机体的免疫耐受中发挥重要作用。在免疫稳定状态下，分布于外周非淋巴组织的 DC 处于非成熟状态，主要功能为识别和摄取抗原。
与其功能相适应，非成熟 DC 表面表达低水平的 MHC II 类分子和共刺激分子，高表达一系列受体以便于识别与病原体相关的物质，包括多种 Toll 样受体（Toll like receptor，TLR），C 型凝集素如甘露糖受体、DEC205 等。一旦发生感染或组织损伤，非成熟 DC 就会向炎性部位迁移，摄取加工抗原，并释放大量的炎性因子，激发天然免疫应答，避免感染的扩散。
相应地，非成熟 DC 发生了一系列的变化，获得了成熟表型及功能：
① 丢失用于吞噬的受体；
② 高表达 MHC II 类分子和共刺激分子，包括 CD40、CD80 和 CD86；
③ 形态发生改变；
④ 启动抗原处理机制，包括溶酶体相关的膜蛋白（DC-LAMP）的水平增加。同时，成熟 DC 的趋化因子受体表达谱发生变化，CCR1、CCR5 和 CCR6 等的表达降低，而 CCR7 的表达会增高，从而促使 DC 从外周组织沿传入淋巴管迁移至邻近的次级淋巴组织，与初始 T 细胞相遇，诱导其活化并增殖成为抗原特异性的效应 T 细胞，从而启动免疫应答。因此，DC 在非成熟期和成熟期的表型和功能各不相同。
原理
树突状细胞表型检测的基本原理是根据其表面分子表达谱，联合运用多种荧光素标记的单抗，通过流式细胞仪的方式来检测和鉴定 DC 及其亚型。DC 主要表达的分子有 CD11c、MHCI 和 MHCII 类抗原，共刺激分子如 CD80、CD86 和 CD40，黏附分子如 ICAM-1、VCAM-1，趋化因子受体如 CCR6、CCR7 和 CXCR4 等。并且随着 DC 的成熟，其 MHC 分子、共刺激分子和黏附分子表达明显增强，趋化因子受体表达谱发生重要变化。其中，CD83 的表达往往作为衡量人源 DC 成熟程度的一个重要指标。以上标志均可利用免疫荧光技术做 FACS 分析，来检测和鉴定 DC 及其成熟状态（亚型）的变化。
材料与仪器
试剂：
（1）待测细胞悬液，浓度为 2 x 10 个/ml。
（2）阻断抗体 IgG 或 Fc 受体阻断试剂（即 CD16/32 抗体）。
（3）荧光素标记的目的单克隆抗体及相应对照抗体。
（4）2% 甲醛溶液。
仪器：
流式检测专用试管、流式细胞仪。
步骤
树突状细胞表型检测的基本过程可分为以下几步：
（1）准备 3 支 1.5 ml 离心管，每管中加入 2 x 107 个/ml 细胞悬液 50 μl，做好标记。
（2）每管加入适量 IgG 或 Fc 受体阻断试剂（即 CD16/2 抗体），4 ℃ 孵育 10 分钟。
（3）在其中两管分别加入同一种荧光素标记的同型对照抗体和目的抗体，避光，4 ℃ 孵育 15 分钟。
（4）每管加入 1 ml PBS，1500 g 离心 3 分钟后迅速倒掉上清，用手指轻弹管底，使细胞沉淀变松。
（5）每管加入 1 ml PBS 后，移入流式检测专用试管中，4 ℃ 避光待检（可保存 ≤ 4 小时）。
（6）用流式细胞仪进行检测并分析结果。
注意事项
（1）每管的细胞数量应大于 104 个。
（2）死细胞会非特异地结合抗体，操作中要注意减少死细胞的产生。若死细胞过多，可通过利用 PI 或 7-氨基放线菌素 D（7AAD）标记来排除死细胞的干扰。
（3）若标记结束后无法直接检测，可以用 2%～4% 多聚甲醛固定后置于 4 ℃ 1 周内检测。
来源：丁香实验
