丁香实验_LOGO
登录
提问
提问
我要登录
|免费注册
点赞
收藏
wx-share
分享

丙酮酸脱氢酶活性检测

相关实验:有氧氧化过程关键酶和重要产物测定

别名:蛋白酶解

最新修订时间:

简介

丙酮酸脱氢酶系是一多酶复合体,定位于线粒体,由丙酮酸脱氢酶(pyruvatedehydrogenase,PDH)、二氢硫辛酸乙酰转移酶、二氢硫辛酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶激酶、丙酮酸脱氢酶磷酸酶、功能未知的蛋白 X 和一些辅助因子等共同构成。其中以丙酮酸脱氢酶的功能最为重要,催化丙酮酸脱羧成乙酰 CoA。丙酮酸脱氢酶的活性可以评价细胞柠檬酸循环代谢的速率。

原理

丙酮酸脱氢酶的检测原理是利用 PDH 抗体将 PDH 酶复合物吸附并固定于检测孔,然后加入反应底物 CoA。PDH 催化 CoA 生成乙酰 CoA,释放出 CO2,并使 NAD转换为 NADH。NADH 可进一步催化反应标记物呈现颜色反应(黄色),在 450 nm 检测吸光度值可计算 PDH 的酶活性。

材料与仪器

1、PDH 抗体

2、反应底物 CoA

步骤

丙酮酸脱氢酶活性检测的基本流程如下:

A、利用 PDH 抗体将 PDH 酶复合物吸附并固定于检测孔,然后加入反应底物 CoA。PDH 催化 CoA 生成乙酰 CoA,释放出 CO2,并使 NAD转换为 NADH。NADH 可进一步催化反应标记物呈现颜色反应(黄色)。

B、在 450 nm 检测吸光度值可计算 PDH 的酶活性。

来源:丁香实验

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序