蛋白标记实验，无蛋白质的区域具有高背景，怎么分析

木子倩影

2022-03-21

府宅

2022-03-21

有帮助

检测试剂中的蛋白质抗体与特异性抗原结合，同时非特异性抗原同时也会非特异的结合在固相上的空白区域，产生高背景

bamboopiggy

2022-03-21

有帮助

1.换用一下封闭液，一般如果你用牛奶封闭有高背景，你就换用bsa试试。

2.如果你条带能明显看出来的情况下，可以提到洗膜液的浓度，尽可能的洗掉背景。

3，如果条带和背景很接近的，建议换一个公司，重新买抗体。

4.实在不行，就提高一抗浓度，试试，

bqejjh123

2022-03-21

有帮助

1.可能由于封闭时间过短或封闭缓冲液使用不当。大多数一抗基本不会和白蛋白或酪蛋白发生交叉反应。如果任何没有蛋白质的区域具有高背景，则封闭步骤可能无法正常工作。

2.一抗或二抗的浓度过高所致：适当降低抗体浓度。

3.洗涤不够充分：可以增加洗涤的次数。

4.孵化温度过高：一抗的孵育温度以4°C左右为宜。

5.转印膜选用不当，或者转印膜干燥：一般情况下选用PVDF膜具有较好的转印效果，同时防止膜干燥。

6.较高分子量的高背景也有可能是由于还原试剂、SDS或样品加热方式时长不正确。