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蛋白标记实验,无蛋白质的区域具有高背景,怎么分析

相关实验:有氧氧化过程关键酶和重要产物测定

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木子倩影

蛋白标记实验,无蛋白质的区域具有高背景,怎么分析

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3 个回答

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府宅

有帮助

检测试剂中的蛋白质抗体与特异性抗原结合,同时非特异性抗原同时也会非特异的结合在固相上的空白区域,产生高背景

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bamboopiggy

有帮助

1.换用一下封闭液,一般如果你用牛奶封闭有高背景,你就换用bsa试试。

2.如果你条带能明显看出来的情况下,可以提到洗膜液的浓度,尽可能的洗掉背景。

3,如果条带和背景很接近的,建议换一个公司,重新买抗体。

4.实在不行,就提高一抗浓度,试试,

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bqejjh123

有帮助

1.可能由于封闭时间过短或封闭缓冲液使用不当。大多数一抗基本不会和白蛋白或酪蛋白发生交叉反应。如果任何没有蛋白质的区域具有高背景,则封闭步骤可能无法正常工作。

2.一抗二抗的浓度过高所致:适当降低抗体浓度

3.洗涤不够充分:可以增加洗涤次数

4.孵化温度:一抗的孵育温度以4°C左右为宜。

5.转印膜选用不当,或者转印膜干燥:一般情况下选用PVDF膜具有较好的转印效果,同时防止膜干燥

6.较高分子量的高背景也有可能是由于还原试剂、SDS或样品加热方式时长不正确

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