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柠檬酸合酶活性检测

相关实验:有氧氧化过程关键酶和重要产物测定

最新修订时间:

简介

柠檬酸合酶(citroyl synthetase)在柠檬酸循环第一步反应中催化乙酰 CoA 与草酰乙酸结合,生成柠檬酸和带有硫醇基的 CoA(CoA-SH)。其中,乙酰 CoA 和草酰乙酸是柠檬酸合酶的激活剂,而 NADH、琥珀酰 CoA 是其抑制剂。

原理

柠檬酸合酶活性检测的基本原理是:在反应过程中生成的 CoA 可与二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)反应生成有呈色反应的二硝基苯甲酸(TNB)。通过检测 412 nm 的吸光度值,可分析柠檬酸合酶的活性。

材料与仪器

1、二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)

2、样品

步骤

柠檬酸合酶活性检测的基本流程如下:

A、将样品与二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)孵育,在反应过程中生成的 CoA 可与二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)反应生成有呈色反应的二硝基苯甲酸(TNB)。

B、检测 412 nm 的吸光度值,分析柠檬酸合酶的活性。

来源:丁香实验

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