简介
贴壁细胞有机溶剂固定，也称贴壁细胞用有机溶剂脱水法，是常用的细胞固定方法之一。
原理
贴壁细胞用有机溶剂固定的基本原理是亲水的有机溶剂能够迅速溶解脂类物质，因此能够产生通透效应，并且迅速使蛋白质脱水，导致细胞蛋白质沉淀于亚细胞结构上，能够被抗体所识别。
材料与仪器
器材：培养皿、移液器。
试剂：
① PBS
② 甲醇、丙酮或新配制的甲醇和丙酮（1:1）的混合液；
步骤
贴壁细胞有机溶剂固定法的基本过程可分为如下几步：
A. 用 PBS 冲洗玻片或培养皿。
B. 吸掉或倒掉 PBS，但不要让细胞样本干燥。
C. 用有机溶剂固定、透化细胞，在室温下固定；如果在组织培养皿中进行细胞固定，则在室温下加入新配制的甲醇和丙酮的混合液。
注意事项：高浓度的丙酮会使塑料溶解。
D. 轻轻摇动玻片或培养皿，然后静置 2 分钟。
E. 弃去固定液，用 PBS 冲洗。
F. 即可进行封闭和抗体免疫染色。
注意事项
1. 不同的固定剂对各种抗原的影响是不同，如果缺乏有关资料，建议开始时使用 50% 丙酮和 50% 甲醇混合液。
2.5% 冰乙酸、95% 乙醇（酸化乙醇）可于-20℃ 下固定 5 分钟，然后用常规方法洗涤。某些抗原用酸化乙醇溶液固定后，抗原与抗体结合的能力增强，因此有些实验室常用这种固定方法。但该固定法也可能破坏某些抗原，所以当检测一种未知特性的抗原时，这种方法不是首选的固定方法。
3. 用有机溶剂固定的细胞样本可在-70℃ 保存。
4. 固定完成之后，去除样本中的固定液，空气干燥（不用 PBS 洗），干燥后的样本于-70℃ 密封保存，在解冻时必须小心，以防抗原被破坏。先将样本转移至 50% 甲醇和 50% 丙酮的混合液中（干冰预冷），然后将此混合液转移至室温下。当固定液温度达室温后，取出样本，用 PBS 冲洗，然后可以加入抗体。
来源：丁香实验
