简介
贴壁细胞多聚甲醛固定法，也称交联法，是免疫细胞染色步骤之一。
原理
贴壁细胞多聚甲醛固定法的基本原理是多聚甲醛能够使蛋白的氨基酸基团与细胞内其他分子相互连接，交联成网状结构，从而使抗原固定在原位上，再经去污剂溶解脂类成分，增强细胞的通透性，然后被抗体所识别。
材料与仪器
器材：玻片、培养皿。
试剂：
① PBS 配制 4％ 多聚甲醛;
② 0.2% TritonX-100 或 NP-40 的 PBS 溶液;
步骤
贴壁细胞多聚甲醛固定法（交联法）的基本过程可分为如下几步：
A. 用 PBS 配制 4％ 多聚甲醛。
B. 用 PBS 洗涤玻片或培养皿。
C. 倒掉 PBS，但勿使样本干燥。
D. 加入 4% 多聚甲醛，室温下静置 10 分钟。
E. 用 PBS 洗涤细胞 2 次。
F. 用含 0.2% TritonX-100 或 NP-40 的 PBS 溶液透化固定后的细胞 2 分钟（室温），有些样本可能需要长达 15 分钟，时间视具体抗原而定。
G.PBS 洗涤细胞 4 次，洗涤时间不少于 5 分钟。
H. 样本加入抗体进行免疫染色。
注意事项
1. 多聚甲醛固定细胞是不稳定的，样本经多聚甲醛固定后应再用去污剂处理，如果样本在水溶液中浸泡的时间过长，则会使交联结构解体。
来源：丁香实验
