简介
B 淋巴细胞的分离是利用 B 细胞多种生物学特性，如 B 细胞表达 CD19、CD20 分子，具有膜免疫球蛋白等，可将 B 细胞与其他细胞进行分离。
原理
T 细胞清除法基本原理是用抗 T 细胞单克隆抗体结合 T 细胞，通过补体介导细胞毒作用引起 T 细胞的裂解，再进一步通过 Ficoll 梯度密度离心法去除死细胞，收集 B 细胞。该方法最大的优点是所分离的 B 细胞纯度较高（＞ 95％），并且所获得的细胞活力高。
材料与仪器
试剂：
（1）抗 T 细胞单克隆抗体
（2）豚鼠补体
（3）Ficoll 原液
（4）含 10％ FCS 的 RPMI 1640 培养液、无菌 PBS
仪器：
（1）15 ml 无菌离心管、3 ml 移液滴管、手术镊子、剪刀、移液枪
（2）离心机、37 ℃ 培养箱、超净台
步骤
T 细胞清除法分离 B 淋巴细胞的基本过程可分为以下几步：
（1）制备单细胞悬液。
（2）裂解 T 细胞。
在制备好的淋巴细胞悬液中，加入抗小鼠或人 T 细胞单克隆抗体，0.5 ml/管，以 10:1（体积比）的比例混合细胞悬液和抗体混合液，37℃ 培养箱中孵育 30 分钟；再加兔补体（4:1），0.5 ml/管，37 ℃ 培养箱中继续孵育 30 分钟，引起 T 细胞 100％ 裂解，无菌 PBS 洗涤一次，备用。
（3）Ficoll 法纯化 B 细胞。
通过 Ficoll 梯度密度离心法离心 20 分钟，丢弃第一个白环层死亡的 T 细胞，小心地收集第二个白环层活细胞即 B 细胞，用无菌 PBS 洗涤 1 次，再用含 10％ FCS 的 RPMI 1640 培养液重悬，计数细胞后调整细胞浓度为 2x106/ml，备用。
来源：丁香实验
