简介
B 淋巴细胞的分离是利用 B 细胞多种生物学特性，如 B 细胞表达 CD19、CD20 分子，具有膜免疫球蛋白等，可将 B 细胞与其他细胞进行分离。
原理
尼龙棉柱法分离 B 淋巴细胞的基本原理是利用 T、B 细胞对尼龙棉的不同吸附特性，分离 T 细胞和 B 细胞。尼龙棉柱法分离 B 细胞获得率比较高，但是细胞纯度较差，B 细胞纯度平均只能达到 85.5％。
材料与仪器
试剂：
1. 蒸馏水
2. 含 20％ 小牛血清的 RPMI 1640 培养基
3. 0.85％ 冰冷生理盐水
4. 0.2 mol/L 盐酸
5. 分离获得的人外周血单个核细胞或小鼠脾脏来源的单个核细胞
仪器：
1. 尼龙棉柱
2. 50 ml 玻璃注射器
3. 尼龙棉柱固定支架
4. 镊子、烧杯、铝箔、漏斗、一次性手套等
步骤
尼龙棉柱法分离 B 淋巴细胞的基本过程可分为以下几步：
1．尼龙棉柱的准备
（1）将尼龙棉 50 g 浸泡于装有 0.2 mol/L 盐酸的烧杯（操作过程中需戴一次性手套），加热至沸腾 5～10 分钟。
（2）用大量蒸馏水漂洗 10 遍以上（漂洗至第 10 遍时用 pH 计测其 pH 值以判断是否洗干净），洗净后将尼龙棉摊在铺有纱布的方盘内，37 ℃ 温箱干燥 2～3 天后，贮藏在带盖的方盘内。
（3）将尼龙毛撕匀，取 50 ml 玻璃注射器，拔去注射芯，在注射器头上套一段带夹子的胶管。用小镊子将其填塞于注射器，约 20 ml 的体积。
（4）将填好尼龙毛的注射器连同注射器芯一起包好，高压灭菌。
2．过柱分离细胞
（1）将 20％ 小牛血清的 RPMI 1640 培养基预热至 37 ℃。
（2）将尼龙棉柱固定在支架上，倒入 37 ℃ 的细胞培养液，关闭阀门一定时间，然后打开阀门，放掉细胞培养液，清洗几次尼龙毛，关上阀门。共需用 25～50 ml 培养液。
（3）将待分离的细胞液用预先加温的培养液配制成 5x10/ml 的悬液。
（4）将细胞液加入尼龙棉柱，使之刚没过尼龙毛柱。盖上注射器，37 ℃ 温育 45 分钟至 1 小时。
（5）打开下口阀门，缓慢放流（1 滴/分钟），可用 5～10 ml 预热的培养基洗柱。收集流出液至离心管，1000 r/min 或 200 g 离心 10 分钟，收集 T 细胞。
（6）通过锥虫蓝染色检查细胞活力，计数细胞，然后根据需要用 PBS 或合适的培养基将细胞稀释备用。
（7）关闭尼龙棉柱下口，于柱内加入 0.85％ 冰生理盐水，振荡，并套上注射器芯，打开下口，快速推出注射器内液体，即获得黏附于尼龙棉上的 B 淋巴细胞、单核巨噬细胞等。
注意事项
1．应根据富集的细胞量选择所用的尼龙棉柱，一般情况下，若分离少于 1.5x10 细胞，需用 12 ml 尼龙棉柱；1.5x10～3x10 细胞，需用 20 ml 尼龙棉柱。
2．要进一步富集 B 淋巴细胞，可以利用单核巨噬细胞的易于黏附特性，将单核巨噬细胞和 B 细胞分开。
来源：丁香实验
