滤泡辅助性T细胞的分化诱导

滤泡辅助性T细胞（T follicular helper cells，Tfh）是主要负责辅助B细胞的T细胞亚群。

Tfh上表达的CD40Lhi和ICOShi分别通过与B细胞上CD40和ICOSL结合，以及Tfh所分泌的IL-21，在刺激B细胞增殖、分化以及免疫球蛋白类别的转换中起着十分重要的作用。

此外，表达CXCR5的Tfh在淋巴滤泡处产生的CXCL13趋化下，被募集到淋巴滤泡并与B细胞共定位和相互作用。

因此，CXCR5成为Tfh迁移、定位重要的“转运分子”（traffickingmolecules），也是Tfh细胞重要的表面标志，而Bcl-6目前认为是可能控制初始T细胞分化为Tfh的转录因子。

滤泡辅助性T细胞的分化诱导的基本原理是CXCR5是Tfh迁移、定位重要的“转运分子”（traffickingmolecules），也是Tfh细胞重要的表面标志，而Bcl-6目前认为是可能控制初始T细胞分化为Tfh的转录因子。

试剂：

1.C57BL／6J小鼠（雌性，6～8周龄，SPF级）

2. 抗CD3、抗CD28、抗IL-4、抗IFN-y及抗TGF-β抗体

3. rmIL-21

4. 含10％ FBS的RPMI 1640完全培养基

仪器：

1.96孔细胞培养板

滤泡辅助性T细胞的分化诱导的基本过程可分为以下几步：

（1）包被：诱导分化的前一天，用终浓度为5 μg／ml抗CD3抗体包被96孔细胞培养板，4 ℃过夜。

（2）初始细胞的制备：取C57BL／6J小鼠的脾脏并制成单细胞悬液，流式sorting 获得CD4＋CD25的初始CD4T细胞。

（3）用含10％ FBS的 RPMI 1640调整细胞浓度为2x106个／ml，在96孔细胞培养板的每孔中加入50 μl的CD4＋CD25T细胞（1x105个），每组设3个复孔。

（4）每孔加入终浓度为2 μg／ml的抗CD28抗体、50 ng／ml 的IL-21、10 μg／ml的抗IFN-y抗体、10 μg／ml的抗IL-4抗体和20 μg／ml的抗TGF-β抗体。

（5）用含10％ FBS的RPMI 1640将每孔的总体积均补至200 μl，混匀后将96孔圆底细胞培养板置于37 ℃、5％ CO₂的细胞培养箱中培养4天。

（6）培养4天后收集分化的Tfh细胞，进行鉴定。