Feulgen 染色法（组织学基本技术）

Feulgen 染色技术是显示 DNA 定量测定的主要染色方法之一。

Feulgen 染色技术的基本原理是标本通过 60 ℃ 的 1mol/L HCl 水解作用，可将 DNA 分子中嘌呤碱基与去氧核糖之间的糖苷键打开，所形成的醛基具有还原作用，它再与无色品红结合形成紫红色化合物，从而显示出 DNA 的分布。

Feulgen 染色技术的基本过程可分为如下几步：

A. 先将恒温水浴箱达到 60 ℃ 恒温。

B. 烤干后石蜡切片经两道二甲苯将石蜡脱去。共约 40 min，以脱净石蜡为准。

C. 用两道无水乙醇将二甲苯洗去。共约 6 min。

D. 经 95％、90％、80％ 及 70％ 乙醇脱水。每道 2 min。

F. 蒸馏水 60 ℃ 1 min（染缸应提前 10 min 放在恒温水浴箱预温）。

G. 1 mol/L HC1 60 ℃ 8～10 min（染缸应提前 10 min 放在恒温水浴箱预温）。

H. 1 mol/L HC1（室温）1 min。

I. Schiff 试剂 1 h。

J. 偏重亚硫酸钠洗液洗三次。

K. 自来水→蒸馏水。

L. 固绿染色液 1～2 min（可省略）。

M. 蒸馏水。

O. 二甲苯两道，每道 20 min。

P. 中性树胶。

注意事项：切片不经过 60 ℃ 蒸馏水和 60 ℃ 1 mol/L HC1，直接进入室温的 1 mol/L HC 18~10 min。

1. 1 mol/L HC1、60℃ 下水解时间要适当。如水解时间不够，反应会变弱；如水解时间过长，则脱氧核糖也易脱掉，反应也会减弱。水解时间长短要视标本的类型（如厚薄等）、固定剂的性质以及酸的浓度而定。

2. Feulgen 反应成功与否的一个非常关键的因素是 Schiff 试剂的质量。Schiff 试剂的配制方法有误直接影响 DNA 的染色反应。

3. 因 Carnoy 固定固定一般 6 h 左右，如白天取材标本需经 95％ 乙醇 4 ℃ 过夜。

4. 实验要设对照组，以便验证实验反应的结果。