DNA的Feulgen染色法

1.目的与原理

实验目的：

学习DNA的Feulgen染色方法，观察染色结果，了解反应原理。

实验原理：

DNA经弱酸(1mol／L HCl)水解，其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开，使脱氧核糖的一端形成游离的醛基，这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应，形成紫红色的化合物，使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色团，所以具有颜色。对照组预先用热三氯醋酸或DNA酶处理，抽提去细胞中的DNA而得到阴性反应，从而证明了Feulgen反应的专一性。

2.实验用品

材料：

（1）．Carnoy液固定的鼠肝石蜡切片

（2）．Carnoy液固定的洋葱根尖或蚕豆根尖切片。

试剂：

（1）．Carnoy固定液：3份95％酒精加入1份冰醋酸。

（2）．1 mol／L HCl：取比重1．18的浓HCl 82．5ml，加水至100ml。

（3）．Schiff试剂

先将200ml蒸馏水煮沸，由火上取下，加入碱性品红1g，充分搅拌，有助于溶解。待先将200ml蒸馏水煮沸，由火上取下，加入碱性品红1g，充分搅拌，有助于溶解。待亚硫酸钾或偏亚硫酸钠充分振荡后盖紧瓶塞，放于暗处过夜。次日取出，呈淡黄色或近于无色，加中性活性炭一匙，约0．5g，剧烈振荡1min，过滤后即得无色品红。无色品红配成后须塞紧瓶塞。外包黑布或黑纸，贮存在冰箱或黑暗低温处。

（4）．亚硫酸水溶液(漂白液)

10％偏重亚硫酸钠水溶液5ml，蒸馏水100ml，1 mol/L HCl 5ml，摇匀，塞紧瓶塞。此溶液在使用前配制，否则会因二氧化硫的逸出而失效。

（5）．5％三氯醋酸

（6）．0．5％固绿酒精溶液(95％酒精溶解)

3.实验方法：

石蜡切片→溶腊二甲苯Ⅰ（3～5min）→溶腊二甲苯Ⅱ（3～5min）→1/2纯酒精＋1/2二甲苯（3～5min）→纯酒精Ⅰ（2～3min）→纯酒精Ⅱ（2～3min）→95％酒精 （2～3min）→83％酒精（2～ 3min）→70％酒精（2～3min）→蒸馏水→5％三氯醋酸，90℃，15min→70％酒精（2～3min）→蒸馏水（过一下）→1mol/L HCl 60℃，8～15min（水浴或温箱中）→Schiff试剂（60～90min）→亚硫酸水（Ⅰ Ⅱ Ⅲ）（各5min）→流水冲洗（5～15min）→蒸馏水→0.5％固绿水溶液（复染）（1min）（此步要快，以免过染）→蒸馏水→70％酒精→83％酒精→95％酒精→纯酒精Ⅰ→纯酒精Ⅱ→透明二甲苯Ⅰ→透明二甲苯Ⅱ→封片（贴上标签，注明材料，反应名称，作者姓名及日期）

显微镜下检查：

实验组：细胞核呈紫红色，核仁及细胞质呈绿色

对照组：由于DNA被提取破坏，所以细胞核无紫红色。