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DNA的Feulgen染色法

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2967

 

1.目的与原理

实验目的:
   学习DNA的Feulgen染色方法,观察染色结果,了解反应原理。

实验原理:
   DNA经弱酸(1mol/L HCl)水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应,形成紫红色的化合物,使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。紫红色的产生,是由于反应产物的分子内含有醌基,醌基是一个发色团,所以具有颜色。对照组预先用热三氯醋酸或DNA酶处理,抽提去细胞中的DNA而得到阴性反应,从而证明了Feulgen反应的专一性。

2.实验用品
材料:
(1).Carnoy液固定的鼠肝石蜡切片
(2).Carnoy液固定的洋葱根尖或蚕豆根尖切片。

试剂:
(1).Carnoy固定液:3份95%酒精加入1份冰醋酸。
(2).1 mol/L HCl:取比重1.18的浓HCl 82.5ml,加水至100ml。
(3).Schiff试剂
  先将200ml蒸馏水煮沸,由火上取下,加入碱性品红1g,充分搅拌,有助于溶解。待先将200ml蒸馏水煮沸,由火上取下,加入碱性品红1g,充分搅拌,有助于溶解。待亚硫酸钾或偏亚硫酸钠充分振荡后盖紧瓶塞,放于暗处过夜。次日取出,呈淡黄色或近于无色,加中性活性炭一匙,约0.5g,剧烈振荡1min,过滤后即得无色品红。无色品红配成后须塞紧瓶塞。外包黑布或黑纸,贮存在冰箱或黑暗低温处。

(4).亚硫酸水溶液(漂白液)
   10%偏重亚硫酸钠水溶液5ml,蒸馏水100ml,1 mol/L HCl 5ml,摇匀,塞紧瓶塞。此溶液在使用前配制,否则会因二氧化硫的逸出而失效。

(5).5%三氯醋酸
(6).0.5%固绿酒精溶液(95%酒精溶解)

3.实验方法:

  石蜡切片→溶腊二甲苯Ⅰ(3~5min)→溶腊二甲苯Ⅱ(3~5min)→1/2纯酒精+1/2二甲苯(3~5min)→纯酒精Ⅰ(2~3min)→纯酒精Ⅱ(2~3min)→95%酒精 (2~3min)→83%酒精(2~ 3min)→70%酒精(2~3min)→蒸馏水→5%三氯醋酸,90℃,15min→70%酒精(2~3min)→蒸馏水(过一下)→1mol/L HCl 60℃,8~15min(水浴或温箱中)→Schiff试剂(60~90min)→亚硫酸水(Ⅰ Ⅱ Ⅲ)(各5min)→流水冲洗(5~15min)→蒸馏水→0.5%固绿水溶液(复染)(1min)(此步要快,以免过染)→蒸馏水→70%酒精→83%酒精→95%酒精→纯酒精Ⅰ→纯酒精Ⅱ→透明二甲苯Ⅰ→透明二甲苯Ⅱ→封片(贴上标签,注明材料,反应名称,作者姓名及日期)

显微镜下检查:
实验组:细胞核呈紫红色,核仁及细胞质呈绿色
对照组:由于DNA被提取破坏,所以细胞核无紫红色。

 

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