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苏木素-伊红染色技术

相关实验:组织学基本技术

别名:hematoxylin-eosin stain,HE

最新修订时间:

简介

HE 为酸性染料,显示胞核、细胞质以及某些细胞器,是组织学及病理学检查最基本的方法。

原理

苏木素-伊红染色技术的基本原理是 HE 为酸性染料,显示胞核、细胞质以及某些细胞器,是组织学及病理学检查最基本的方法。适用于各种脏器的一般观察,对各种液体固定的组织均可使用。不同脏器所用的固定液往往不一致,作用时间也不一样。

材料与仪器

器材:烘箱、石蜡切片等。


试剂:


① 70% 乙醇


② 80% 乙醇


③ 95% 乙醇


④ 100% 乙醇


⑤ 蒸馏水


⑥ Mayer 苏木素

(含苏木精 2 g、无水乙醇 40 ml、硫酸铝钾 100 g、蒸馏水 600 ml、碘酸钠 0.4 g)


⑦ 1% 盐酸乙醇

⑧ 碳酸锂饱和水溶液


⑨ 1% 伊红(醇溶性)


⑩ 二甲苯


⑪ 中性树胶

步骤

苏木素-伊红染色技术的基本过程可分为如下几步:

A. 烤干后石蜡切片用两道二甲苯将石蜡脱去。共约 40 min,以脱净石蜡为准。

B. 用两道无水乙醇将二甲苯洗去。共约 6 min。

C. 经 95%、90%、80% 及 70% 乙醇脱水。每道 2 min。

D. 蒸馏水

E. 苏木素(染细胞核)。一般 2~3 min(示苏木素配方而定)


F. 自来水


G. 蒸馏水洗

H. 1% 盐酸乙醇溶液(分色),2~3 s

I. 自来水。

J. 碳酸锂饱和水溶液(反蓝)

K. 蒸馏水洗

L. 1% 伊红溶液 10~15 s(示伊红颜色而定)

M. 两道 95% 乙醇脱水数秒(需要快速过,时间长易褪色)

N. 两道无水乙醇脱水 2~3 min

O. 两道二甲苯透明共 40 min

P. 树胶封固

注意事项

1. 实验室常以 95% 工业乙醇来配制各种低浓度的乙醇,因 100% 纯乙醇要比 95% 乙醇价格昂贵,一般不用于稀释。

2. 苏木素配制此染液的关键在于碘酸钠的量。


① 要根据季节气温的改变,适当调整碘酸钠的量,配方里碘酸钠的量一般只适用于夏天,随着气温降低,氧化速度降低,可适当增加碘酸钠的量,要注意应该从 0.05 g 开始一点点增加,过量的碘酸钠可使苏木素过氧化,不仅容易失效,而且核浆共染。


② 称量要准确,避免染不上或染得很慢。此液也是进行性苏木素液,从理论上说染色不需要分化,但适当深染后再分化,染色效果更好。

来源:丁香实验

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