原理
用一些化学药品配成离析液,便组织细胞的胞间层溶解,细胞彼此分离,获得分散的、单个的完整细胞,以便观察不同组织的细胞形态和特征。经离析制备的材料可制作临时装片观察,也可制成永久玻片标本长期便用。
材料与仪器
离析液
玻片 镊子
步骤
1 铬酸-硝酸离析法
适用于木质化的组织,如导管、管胞、纤维等。离析液由 10%铬酸和 10%硝酸等量混合而成。具体步骤是将植物材料(如木材、枝条、果壳等)先切成火柴棒粗细、长约 1cm 的小条或小块,放人小玻璃管中,加人离析液,其量约为材料的 20 倍,将口盖严塞紧,放在30-40℃的温箱中,经 1-2d。具体浸渍的时间可因材料块的大小而不同,如果两天以后仍未分离,则可换新的离析液继续浸渍。草本植物可不必加温。
检查材料是否离析:以细胞间的胞间层溶解、细胞彼此能够分开为宜。可取出材料少许放在载玻片上的水滴中,加盖破片,用滴管的橡皮头轻轻敲压,若材料分离,表示浸渍时间已够。这时倒去离析液,用清水浸洗已离析好的材料。将玻璃管静置,待材料下沉后,再倒去上清液,如此反复多次,至没有任何颜色为止(如有离心机,可将材料转人离心管,用离心机洗酸更为迅速),然后转移到 70%酒箱中保存备用。需要时,可按临时装片法制片观察或制作成永久性的玻片标本。
2. 盐酸-草酸按离析法
这种方法较前面的方法缓和,适用于草本植物的髓、薄壁组织和叶肉组织等柔软材料。具体方法是:把材料切成小块,约 1cmx0.5cmx0.2cm 大小,放入 3:1 的 70%或 90%酒精和浓盐酸中。若材料有空气,应抽气,抽气后更换一次离析液。 24min后,用水清洗干净。放入 0.5%草酸按水溶液中,时间的长短视材料的性质而定。可以每隔 1-2d 作检查。其余方法同上。
3 硝酸离析法
适用于木材坚硬的材料,离析液为 30%-40%的硝酸液。离析时可将材料依上法切成小段,放人离析液中,然后将盛有材料的烧杯在酒精灯上加热,煮半小时以上,当发现材料松软时,即可倒去离析液,用水洗 5-6 次,然后贮载在 70%酒精中备用。
4 氢氧化钠透明离析法
此法是目前最简单的透明、离析柔软或较坚硬植物材料的方法。材料经固定以后,投入 5%氢氧化钠水溶液中,在温度为 50℃左右恒温下处理 24-48h。如果离析液发生混浊时,须更换 1-2 次离析液。离析较坚硬的材料时,氢氧化钠的浓度应提高至 6%-10% 。
来源:丁香实验