组织和细胞总RNA提取（TRIzol法）

TRIzol RNA 提取 试剂 盒是由 GIBCO BRL 公司推出专供提取 RNA 的产品，其操作方便、快捷。

（一） 试剂 准备

1 ． TRIzol 试剂。

2 ．氯仿

3 ．异丙醇

4 ． 75% 乙醇（ DEPC H 2 O 配制）

5 ． DEPC H 2 O

（二）操作步骤

1 ． 样品处理：

（１）培养细胞：收获细胞 1-5×10 7 ，移入 1.5ml 离心管 中，加入 1ml Trizol ，混匀，室温静置 5min 。
（２）组织：取 50-100mg 组织（新鲜或 -70 ℃ 及液氮中保存的组织均可）置 1.5ml 离心管 中，加入 1ml Trizol 充分匀浆，室温静置５ min 。

2 ．加入 0.2ml 氯仿，振荡 15s ，静置 2min 。

3 ． 4 ℃ 离心， 12000g × 15min ，取上清。

4 ．加入 0.5ml 异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置 10min 。

5 ． 4 ℃ 离心， 12000g × 10min ，弃上清。

6 ．加入 1ml 75% 乙醇，轻轻洗涤沉淀。 4 ℃ ， 7500g × 5min ，弃上清。

7. 晾干，加入适量的 DEPC H 2 O 溶解（ 65 ℃ 促溶 10-15min ）。

（三）注意事项

1 ．样品量和 Trizol 的加入量一定要按步骤（ 1 ）的比例，不能随意增加样品量或减少 Trizol 量，否则会使内源性 RNase 的抑制不完全，导致 RNA 降解

2 ．实验过程必须严格防止 RNsae 的污染。

（四）总 RNA 定量

RNA 定量方法与 DNA 定量相似。 RNA 在 260nm 波长处有最大的吸收峰。因此，可以用 260nm 波长分光测定 RNA 浓度， OD 值为 1 相当于大约 40 μ g/ml 的单链 RNA 。如用 1cm 光径，用 ddH 2 O 稀释 DNA 样品 n 倍并以 ddH 2 O 为空白对照，根据此时读出的 OD 260 值即可计算出样品稀释前的浓度：
RNA （ mg/ml ） =40 × OD 260 读数×稀释倍数 (n)/1000

RNA 纯品的 OD 260 /OD 280 的比值为 2.0 ，故根据 OD 260 /OD 280 的比值可以估计 RNA 的纯度。若比值较低，说明有残余蛋白质存在；比值太高，则提示 RNA 有降解。