植物组织总RNA的制备:Trizol法
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一、材料、试剂和
仪器
1 材料 植物根或叶
2 试剂
1) Trizol试剂(含酚、异硫氰酸胍和溶解剂等)
2)75%乙醇:用DEPC处理水配制75%乙醇,(用高温灭菌器皿配制),然后装入高温烘烤的玻璃瓶中,存放于低温冰箱。
3 仪器 水浴锅,低温高速离心机
二、实验程序
1 将组织在液氮中磨成粉末后,再以50-100 mg组织加入1mL Trizol液,注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10% 。
2 研磨液室温放置5min,然后以每1mL Trizol液加入0.2 mL的比例加入氯仿,盖紧 离心管 ,用手剧烈摇荡 离心管 15sec。
3 12000g 离心10min,取上层水相于一新的 离心管 ,按每mL Trizol液加0.5 mL异丙醇的比例加入异丙醇,室温放置10min,12000g 离心10min。
4 弃去上清液,按每mL Trizol液加入至少1mL的比例加入75%乙醇,涡旋混匀,4℃下7500g离心5min。
5 小心弃去上清液,然后室温或真空干燥5-10min,注意不要干燥过分,否则会降低RNA的溶解度。然后将RNA溶于水中,必要时可55℃-60℃助溶 10min。RNA可进行mRNA分离,或贮存于70%乙醇中于-70℃保存。
1 材料 植物根或叶
2 试剂
1) Trizol试剂(含酚、异硫氰酸胍和溶解剂等)
2)75%乙醇:用DEPC处理水配制75%乙醇,(用高温灭菌器皿配制),然后装入高温烘烤的玻璃瓶中,存放于低温冰箱。
3 仪器 水浴锅,低温高速离心机
二、实验程序
1 将组织在液氮中磨成粉末后,再以50-100 mg组织加入1mL Trizol液,注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10% 。
2 研磨液室温放置5min,然后以每1mL Trizol液加入0.2 mL的比例加入氯仿,盖紧 离心管 ,用手剧烈摇荡 离心管 15sec。
3 12000g 离心10min,取上层水相于一新的 离心管 ,按每mL Trizol液加0.5 mL异丙醇的比例加入异丙醇,室温放置10min,12000g 离心10min。
4 弃去上清液,按每mL Trizol液加入至少1mL的比例加入75%乙醇,涡旋混匀,4℃下7500g离心5min。
5 小心弃去上清液,然后室温或真空干燥5-10min,注意不要干燥过分,否则会降低RNA的溶解度。然后将RNA溶于水中,必要时可55℃-60℃助溶 10min。RNA可进行mRNA分离,或贮存于70%乙醇中于-70℃保存。