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组织和细胞RNA的制备:TRIzol法

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TRIzol RNA提取试剂盒是由GIBCO BRL公司推出专供提取RNA的产品,其操作方便、快捷。

(一)试剂准备

1. TRIzol试剂。

2. 氯仿

3. 异丙醇

4. 75%乙醇(DEPC H2O配制)

5. DEPC H2O

(二)操作步骤

1. 样品处理:

(1)培养细胞:收获细胞1-5×107,移入1.5ml离心管中,加入1ml Trizol,混匀,室温静置5min。

(2)组织:取50-100mg组织(新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可)置1.5ml离心管中,加入1ml Trizol充分匀浆,室温静置5min。

2. 加入0.2ml氯仿,振荡15s,静置2min。

3. 4℃离心,12000g×15min,取上清。

4. 加入0.5ml异丙醇,将管中液体轻轻混匀,室温静置10min.

5. 4℃离心,12000g×10min,弃上清。

6. 加入1ml 75%乙醇,轻轻洗涤沉淀。4℃,7500g×5min,弃上清。

7. 晾干,加入适量的DEPC H2O溶解(65℃促溶10-15min)。

(三)注意事项

1. 样品量和Trizol的加入量一定要按步骤(1)的比例,不能随意增加样品量或减少Trizol量,否则会使内源性RNase的抑制不完全,导致RNA降解。

2. 实验过程必须严格防止RNsae的污染。

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