徒手切片法

徒手切片法是指手拿刀片，将新鲜材料或预先固定好的材料切成薄片，不经染色或经简单染色，制成水装片后进行临时观察，必要时经镜检后可选择好的薄片经过脱水与染色等制片步骤，制成永久玻片标本供长期使用。此方法的优点是不需要复杂的设备，方法简使，制片迅速，而且能观察到植物组织的天然色泽和活体结构，常用于研究植物解剖结构细胞组织化学成分等，同时也是进行石蜡制片之前科学选材的一种常用简易制片方法。它有利千临时观察、较快地得到结果；其缺点是对于材料体积过小、太软、太硬材料则难于切片，而且不能制作连续切片。

器材：刀片（双面刀片或剃刀）、滴管、毛笔、培养皿、载玻片

试剂：

①切片材料

②清水（乙醇或染料等）

1 材料准备和修整

一般应在适当时期选取发育正常有代表性、软硬适度的新鲜根、茎、叶材料，用刀片将其切成 2-3cm 长的小段，井将其切面削平；若为质地较软而薄的材料如叶片，可沿主脉两侧切成宽 5-6mm 、长 1-1.5cm 的小块，夹在支持物（如萝卜、胡萝卜根、马铃薯块茎等）中进行切片。使用支持物时要先将支持物切成 3-5cm 长、0.5cm 宽的立方形小块，将其中部纵切一缝，然后将修整好的材料夹入其中与支持物一起切片。对于较坚硬的材料，需要经过软化处理才能进行切片。

2 徒手切片方法和步骤

(1)切片前在小培养皿内盛适量清水，并准备毛笔、刀片等用具。

(2) 切片时，右手拿刀片的右下方，左手的拇指、食指与中指夹住材料，拇指的位置稍低于食指，并使材料高出于食指 2-3mm; 切片前滴少许清水于刀面上，用以润湿材料减少切片阻力；切片时，将刀片平放在左手食指上，刀口与材料垂直，双手悬空，运用臂力，自左前方向右后方滑行连续进行切片，动作要敏捷，材料应一次切下，不要拉锯式切片，动作要敏捷，材料应一次切下，不要拉锯式切割，切下数片后，用湿毛笔轻轻将薄片移入培养皿备用。

(3)用毛笔从培养皿中挑选薄而透明、平整的切片 1-2 片放在载玻片中央，制成临时装片观察。

3 染色与保存

(1) 临时观察和短期保存：为了使材料看得更加清楚可将其染色。常用染料有 0.1%亚甲蓝、 05%-1%中性红或 1%番红水溶液等。染色方法是将选好的切片放在载玻片上，用吸水纸吸去多余水分，再滴一滴染料于切片上，加盖玻片进行观察，如需短期保存，可在染色后在切片上滴一滴 10%的甘油，再盖上盖玻片。加甘油的目的是增强切片透明度和避免切片失水变干、变黑。

(2) 徒手切片制成永久制片：染色方案很多，以番红快绿双重滴染的染色方法为例，其过程包括：

①染色：将选好的切片置于载玻片中央，加一滴 1% 番红水溶液，染色 2-3min, 倒掉染液，再滴蒸馏水洗去浮色。

②脱水：依次滴少许 30%-50%-70%-80%-95%等各级酒精各0.5min 进行脱水，每滴一滴酒精后将废液倒人废液培养皿中，注意防止材料掉人废液中。

③复染：倾去 95%酒精后，加一滴 1%快绿（固绿）酒精溶液，复染 20-30,, 再滴以95%酒精或用无水酒精去浮色。

④脱水和透明：倾去 95%酒精，再加一滴无水酒精（两次），然后经 1/2 无水酒精 +1/2二甲苯，再经二甲苯（两次）每次 2-3s,使材料完全透明。若材料出现乳状混浊，则说明脱水不干净，需再用纯酒精脱水，按原步骤透明，透明后保持二甲苯不挥发（若已挥发应再滴一小滴二甲苯），盖好盖玻片后观察。若需永久保存，可在加盖盖玻片前滴一滴加拿大树胶于材料上，再加盖玻片封藏，然后置玻片标本于 30-35℃恒温箱中烘干。