材料与仪器
冻干的纯化蛋白样品
甲酸 氢溴酸 过氧化氢 NaOH 固体
旋转蒸发器 小试管
甲酸 氢溴酸 过氧化氢 NaOH 固体
旋转蒸发器 小试管
步骤
1.加入 100ul 过氧化氢到 900ul 甲酸中,在室温下放置让,将反应产生过甲酸 (HCOOOH)。
2.在冰上冷冻过甲酸至 0°C。
3.在预冷的小试管中,将蛋白质溶解于 50ul 过甲酸中(500ug/ml)。
4.盖上帽子,0°C 孵育混合物 4 h。如果蛋白质不溶,把反应延长到 20 h。
5.加入 30ul 氢溴酸,去除多余的过甲酸。
要特别小心,可能会释放出来少量的溴。
6.用旋转蒸发器或离心冷冻干燥机彻底干燥样品。在浓缩器中加入少量的 NaOH 固体,以去掉多余的溴和甲酸。蒸发干燥约需要 10 min。
由于许多氨基酸被修饰,推荐用过甲酸氧化的蛋白质用于 S—S/S—H(半胱磺酸)和甲硫氨酸基团(甲硫氨酸砜)的定量分析,而不是序列分析。
来源:丁香实验