丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册
点赞
收藏
wx-share
分享

方案1 蛋白质的过甲酸氧化实验

相关实验:电泳分离的蛋白质肽谱和序列分析实验

最新修订时间:

材料与仪器

冻干的纯化蛋白样品
甲酸 氢溴酸 过氧化氢 NaOH 固体
旋转蒸发器 小试管

步骤

1.加入 100ul 过氧化氢到 900ul 甲酸中,在室温下放置让,将反应产生过甲酸 (HCOOOH)。

2.在冰上冷冻过甲酸至 0°C。

3.在预冷的小试管中,将蛋白质溶解于 50ul 过甲酸中(500ug/ml)。

4.盖上帽子,0°C 孵育混合物 4 h。如果蛋白质不溶,把反应延长到 20 h。

5.加入 30ul 氢溴酸,去除多余的过甲酸。

要特别小心,可能会释放出来少量的溴。

6.用旋转蒸发器或离心冷冻干燥机彻底干燥样品。在浓缩器中加入少量的 NaOH 固体,以去掉多余的溴和甲酸。蒸发干燥约需要 10 min。

由于许多氨基酸被修饰,推荐用过甲酸氧化的蛋白质用于 S—S/S—H(半胱磺酸)和甲硫氨酸基团(甲硫氨酸砜)的定量分析,而不是序列分析。

来源:丁香实验

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序