丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册
点赞
收藏
wx-share
分享

方案14 用 GelCode 磷蛋白染色试剂盒对磷蛋白进行染色实验

相关实验:固相化 pH 梯度双向凝胶电泳实验

最新修订时间:

材料与仪器

含蛋白质样品的凝胶
乙酸 钼酸铵溶液 含硝酸的钼酸铵溶液 甲基绿溶液 NaOH 磺基水杨酸溶液 含氯化钙的磺基水杨酸溶液
带有盖子的玻璃或塑料平皿 烘箱 往复式或定轨式摇床

步骤

1.将凝胶放入盛有 50 ml 水的平皿中,在往复式或定轨式摇床上摇动凝胶 1Omin。

2.将凝胶转移到盛有 25 ml 磺基水杨酸溶液的平皿中,摇动 15 mm。

3.再将凝胶放在 25 ml 含氯化钙的磺基水杨酸溶液中,在摇床上摇动 30 min。

4.迅速用清水洗涤凝胶表面以去除连接在其上的氯化钙。

5.将凝胶转移到 25 ml 0.5mol/L NaOH,用盖子将平皿盖上,在 65°C 下保温 20 min。

6.再将凝胶放入 25 ml 钼酸铵溶液中,在摇床上摇动 lOmin。

7.重复步骤6。

8.将凝股转移到 25 ml 含硝酸的钼酸铵溶液中,在摇床上摇动 20 min。

9.将凝胶放人甲基绿溶液中,在摇床上摇动 20 min。

10.进行脱色,将凝胶转移到 25 ml 硫代硫酸钠溶液,在摇床上摇动 15 min。

11.重复步骤10,此时可以看见磷酸化蛋白的绿色点。

12.为了使凝胶完全脱色,将其放人 25 ml 的 7% 乙酸中,在摇床上摇动过夜。在脱色期间,当溶液变绿时,换一次乙酸溶液。

13.在磷酸化蛋白呈现颜色之后,用考马斯亮蓝染凝胶上的总蛋白。

来源:丁香实验

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序