材料与仪器
酪蛋白激酶分析缓冲液 β-酪蛋白 β-酪蛋白储存液
步骤
1. 在置于冰上的离心管内配制含下列成分的 20 μl 反应混合物:
5X 酪蛋白激酶分析缓冲液 4 μl
β-酪蛋白 1 μl
[γ-32P] ATP(终浓度 5 μCi/5 μmol/L ATP) 1 μl
水(取决于下一步所加的激酶样品的量) 0~14 μl
10 mg/ml β-酪蛋白储存液
5X 酪蛋白激酶Ⅰ和Ⅱ分析缓冲液:
100 mmol/L Tris-HCl,30℃ 时(pH 7.5)
25 mmol/L MgCl2
2.5 mmol/L DTT
750 mmol/L KCl
2. 加入 1~14 μl 激酶样品开始反应。
3. 于 30℃ 继续反应一定时间。
4. 分析反应产物。
5X 酪蛋白激酶分析缓冲液 4 μl
β-酪蛋白 1 μl
[γ-32P] ATP(终浓度 5 μCi/5 μmol/L ATP) 1 μl
水(取决于下一步所加的激酶样品的量) 0~14 μl
10 mg/ml β-酪蛋白储存液
5X 酪蛋白激酶Ⅰ和Ⅱ分析缓冲液:
100 mmol/L Tris-HCl,30℃ 时(pH 7.5)
25 mmol/L MgCl2
2.5 mmol/L DTT
750 mmol/L KCl
2. 加入 1~14 μl 激酶样品开始反应。
3. 于 30℃ 继续反应一定时间。
4. 分析反应产物。
来源:丁香实验