含有目的基因真核表达 pEGFP-C1载体的构建实验

【材料】质粒，Taq DNA 聚合酶 引物 dNTP 【试剂】混合物 PCR Buffer 【仪器】PCR 扩增仪

1PCR扩增 2克隆 3转化 4质粒提取

步骤1.PCR 反应液在冰中配制，然后置于PCR 反应仪上进行PCR反应， 这样可增强PCR扩增的特异性， 减少PCR过程中的非特异性反应， 能得到良好的PCR 结果。步骤2.10 ×Ligation Buffer 用之前要震荡混匀。 步骤3.1. 加入DNA的量要小于10 ng，DNA的量过高影响转化效率。 2. SOC培养基可以用LB培养基替代，但是转化率低于使用SOC培养基。 3. 热激温度42 ℃一定要准确，否则影响转化效率。