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含有目的基因真核表达 pEGFP-C1载体的构建实验

相关实验:含有目的基因真核表达 pEGFP-C1 载体的构建实验

最新修订时间:

材料与仪器

【材料】质粒,Taq DNA 聚合酶 引物 dNTP 【试剂】混合物 PCR Buffer 【仪器】PCR 扩增仪

步骤

1PCR扩增 2克隆 3转化 4质粒提取

注意事项

步骤1.PCR 反应液在冰中配制,然后置于PCR 反应仪上进行PCR反应, 这样可增强PCR扩增的特异性, 减少PCR过程中的非特异性反应, 能得到良好的PCR 结果。步骤2.10 ×Ligation Buffer 用之前要震荡混匀。 步骤3.1. 加入DNA的量要小于10 ng,DNA的量过高影响转化效率。 2. SOC培养基可以用LB培养基替代,但是转化率低于使用SOC培养基。 3. 热激温度42 ℃一定要准确,否则影响转化效率。

来源:丁香实验

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