细胞周期分析
最新修订时间：
简介
细胞分裂是一个复杂而精确的生命活动过程，包括分裂前的物质准备（如DNA复制、新合成组蛋白装配成染色质以及组装新的中心体等）及分裂过程。这种细胞物质积累与细胞分裂的循环过程称为细胞周期（cell cycle）。标准的细胞周期一般分为4个时期：G1期、S期、G2期和M期。
常用的细胞周期检测方法，有流式细胞仪检测细胞周期，通过分析CDK的活性检测细胞周期。
当需要研究细胞周期中某一时相所发生的事件、测量细胞周期各时相的长度或使药物处理细胞能得到稳定的效果等时，往往需要将特定细胞群体进行处理，使其中的个体同步地进行细胞分裂。
细胞同步化的方法多样，包括温度休克法、短时间饥饿法、药物抑制法以及离心淘洗法等。
原理
流式细胞仪检测细胞周期的基本原理是荧光素标记的细胞或生物微粒从50～100μm的喷嘴中逐个高速喷出，由激光光源激发荧光，通过荧光检测器和前向散射检测器分别检测荧光和散射光，经计算机分析和处理获得的信息参数（见图7-1）。
可用于细胞计数、不同细胞类型的计数和分选、细胞周期测定等，尤其该仪器的分选过程可以在无菌条件下进行，因此所分选得到的细胞不仅可保持它们的活性，而且可继续在体外培养与增殖。
流式细胞仪检测细胞周期的原理是根据细胞在不同的细胞周期时相中DNA含量存在差异的特点，应用DNA荧光染料染色，检测细胞内DNA荧光强度变化，判断细胞所处的细胞周期（见图7-2、图7-3）。
常用碘化内锭（PI）作为染料。PI为核酸嵌入型染料，可以插入双股螺旋多聚核苷酸结构中，导致DNA和RNA着色。
来源：丁香实验团队
操作方法
流式细胞仪（flow cytometer，FCM）又称荧光激活细胞分类仪（fluorescence activited cell sortor，FACS），由光学系统、电子控制系统以及计算机分析系统三个部分组成。
通过分析CDK的活性检测细胞周期由于不同的细胞周期素依赖蛋白激酶（CDK）在细胞周期的不同时期被激活，所以CDK家族成员的活性可作为诊断细胞所处细胞周期状态的明确标记。
细胞同步化实验在细胞培养过程中，细胞多处于不同的细胞周期时相中。不同时相的细胞对药物干预存在不同的反应，会影响实验的重复性，因此需要制备细胞周期一致的细胞。细胞同步化是解决该问题的好办法。细胞同步化的方法多样，包括温度休克法、短时间饥饿法、药物抑制法以及离心淘洗法等。不同处理使细胞停留在不同的分裂时相中，血清饥饿使细胞停留在G0和G1期；胸苷（thymidine）可使细胞阻滞于S期；有丝分裂摇落法使细胞停止在M
相关产品推荐
