从正常人和骨关节炎患者的关节软骨中分离软骨祖细胞实验

A.组织收集和细胞分离(a)无菌条件下，用10号解剖刀片小心从软骨下骨下面解剖软骨（见本方案后的注解1)。将软骨薄片置于含PBSA的9cm Petri培养皿中。(b)用镊子和刀片仔细将软骨切成1 mm3小块。(C)将软骨小块转移至含18 mL链霉蛋白酶消化培养基的普通器皿或离心管中。(d)置于滚转机37℃处理1 h。(e)吸出消化液弃之。(f)加人18 ml胶原酶消化培养基，再次置于滚转机37℃处

A.组织收集和细胞分离(a)在无菌条件下，小心从关节周围剪下滑膜，戴好锁子甲手套的手固定平顶。(b)将滑膜移至含PBSC的Petri培养皿中，在解剖镜下用镊子取出脂肪组织（见注释1)。(c)将清洁后的滑膜移至新的含PBSC的Petri培养皿中（见注释2)。(d)用刀片和镊子分离组织，与10 ml消化培养基一起移至普通器皿（见注释3)。置于滚转机上37℃过夜。(e)加入黏附培养基，300g离心10m

(a)从培养瓶中吸出生长培养基弃之。(b)PBSA润洗后弃去洗液。(c)加人足量的胰蛋白酶/EDTA覆盖培养瓶底。(d)在37℃孵育5〜10 min(在显微镜下观察细胞是否脱落)(e)重悬细胞，置于15 ml离心管中，300g离心5min。(f)用1ml生长培养基洗涤，转移至普通器皿或离心管中。(g)用血细胞计数板对细胞进行计数。(h)重复离心（620g，10min),弃去上清液。(i)用分化培养