人软骨祖细胞的分化

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人软骨
灭菌分化培养基 PBSA 胰蛋白酶 EDTA:胰蛋白酶（0.05%)和EDTA(0.53mmol L)PBSA配制
离心管 15ml 圆锥底的离心管（50 ml) 血细胞计数板 微量离心器

(a)从培养瓶中吸出生长培养基弃之。

(b)PBSA润洗后弃去洗液。

(c)加人足量的胰蛋白酶/EDTA覆盖培养瓶底。

(d)在37℃孵育5〜10 min(在显微镜下观察细胞是否脱落)

(e)重悬细胞，置于15 ml离心管中，300g离心5min。

(f)用1ml生长培养基洗涤，转移至普通器皿或离心管中。

(g)用血细胞计数板对细胞进行计数。

(h)重复离心（620g，10min),弃去上清液。

(i)用分化培养基将其稀释到1×10⁶个细胞/ml。

(j)按1 ml/管分装到新Eppendorf管中。

(k)300g离心5 min,上清保留不动。

(l)置于37℃孵箱。

(m)每2〜3天更换培养基（见下面的注解1)

(n)培养2〜3周软骨生成（见注解2）

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注解

(1)前几次更换培养基要格外小心，因为只有少量基质将沉淀聚集在一起，操作时很容易分散沉淀。

(2)虽然我们在这里集中阐述的软骨生成，但适当的培养基也可用来诱导其他表型。无论沉积培养还是单层细胞培养，我们都成功地使牛软骨祖细胞获得了成骨、成脂肪和成神经的表型。

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