将基因转移至未分化 ES 细胞实验
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简介
本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。
来源：丁香实验
操作方法
1. 准备下列试剂和材料： 线性化转移基因 DNA（1 mg/ml，溶于无菌 TE） 未分化 ES 细胞 Bio-Rad 电穿孔仪和电穿孔杯 100 mm neoR-MEF 滋养板 ES 生长培养基 含 300 μg/ml G418 的 ES 生长培养基 2. 收获未分化 ES 细胞，以 107 /ml 悬于 ES 生长培养基。 3. 吸取无菌 DNA 加入电穿孔杯。加入 0.8
将ES克隆挑取到96孔板1. 准备下列试剂和材料： ES 生长培养基，含 300 μg/ml G418 和青霉素/链霉素 96 孔平底 neoR-MEF 滋养板 96 孔 U-底板 细而圆的无菌吸头 微量移液器（10~100 μl） 8 道移液器 无菌多道移液器容器 2. 在有 neoR-MEF 滋养层的平底 96 孔板的每孔中加 150 μl 含 G418 和青霉素/链霉素的 ES 培养基。置温箱待用。
分配96孔板上细胞用于冻存和体外分化1. 准备下列试剂和材料： DMSO（组织培养级） 平底 96 孔板 多道移液器 无菌多道移液器容器 ES 生长培养基 ES 分化培养基 无 Ca2+ 和 Mg2+ PBS 胰酶溶液 2X 冻存液 2. PBS 冲洗 96 孔板上的 ES 细胞两次，200 μl/孔。 3. 每孔中 40 μl 胰酶溶液，37℃ 孵育 5 分钟。显微镜下观察细胞脱落和分离情况。 4. 胰酶消
融化96孔板上的细胞1. 准备下列试剂和材料： 96 孔 ES 细胞冻存板 24 孔 MEF 滋养板 塑料盒 ES 生长培养基 微量移液器 2. 在塑料盒内装入无菌水，置温箱中预热。 3. 从 -80℃ 冰箱中取出 96 孔 ES 细胞板。 4. 欲融化的每孔加 100 μl 预热（37℃）ES 生长培养基。盖上盖，在温箱内的塑料盒中放 2 分钟左右，使细胞快速融化。 5. 融化细胞转移到每孔有 2
