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TALEN 的活性检测
最新修订时间：
简介
TALEN 质粒构建好后，在进行动物或细胞操作前，最好检测其活性，确保 TALEN 的有效性，及减少后续筛选突变体的工作量，TALEN 活性越高，后续的筛选突变体的工作量越少。常用的检测 TALEN 活性的方法有以下 3 种：luciferase SSA 法、非配对内切酶法-T7E1 法和限制性内切酶法。
原理
luciferase SSA 重组检测 TALEN 活性原理：一个终止子在 luciferase 的编码区中央（红色标记），luciferase 没有活性。为检测 TALEN 剪切活性，将一个 TALEN 的靶点位置序列插在终止子后（蓝色标记）。在 TALEN 的作用下，靶点位置产生 DSB，细胞通过同源重组方式修复 DNA，形成一个有活性的 luciferase。通过与参照的比值变化反映 TALEN 剪切的活性水平。
非配对内切酶法-T7E1 法的技术原理：如果通过 TALEN 发生突变，将基因组 DNA 做 PCR，并与野生型 DNA 的 PCR 产物等量混合，并退火杂交，将产生非配对 DNA 片段，将能被非配对内切酶-T7E1 剪切。若没有发生突变，将产生配对完整 DNA 双链，而无法被非配对内切酶-T7E1（或 surveyor）识别剪切。这种方法没有限制，基本上在转染效率高的细胞系就可以进行检测。
限制性内切酶法的技术原理：在 TALEN 靶点位置中间序列 Spacer 中有限制性内切酶切位点，如 Hind III。如果通过 TALEN 发生了突变，这个位点将可能被破坏，而不能被 Hind III 酶切；同时野生型的细胞不受影响，仍可被 Hind III 酶切。
来源：丁香实验团队
操作方法
TALEN 质粒构建好后，在进行动物或细胞操作前，最好检测其活性，确保 TALEN 的有效性，及减少后续筛选突变体的工作量，TALEN 活性越高，后续的筛选突变体的工作量越少。常用的检测 TALEN 活性的方法有以下 3 种：luciferase SSA 法、非配对内切酶法-T7E1 法和限制性内切酶法。
非配对内切酶法-T7E1 法检测 TALEN 活性TALEN 质粒构建好后，在进行动物或细胞操作前，最好检测其活性，确保 TALEN 的有效性，及减少后续筛选突变体的工作量，TALEN 活性越高，后续的筛选突变体的工作量越少。常用的检测 TALEN 活性的方法有以下 3 种：luciferase SSA 法、非配对内切酶法-T7E1 法和限制性内切酶法。
限制性内切酶法检测 TALEN 活性TALEN 质粒构建好后，在进行动物或细胞操作前，最好检测其活性，确保 TALEN 的有效性，及减少后续筛选突变体的工作量，TALEN 活性越高，后续的筛选突变体的工作量越少。常用的检测 TALEN 活性的方法有以下 3 种：luciferase SSA 法、非配对内切酶法-T7E1 法和限制性内切酶法。
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