α-病毒：作为基因 转移载体的西门里克森林病毒和辛德毕斯病毒
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简介
α病毒强烈的嗜神经元特性，使其在神经生物学研究中特别有用。但不幸的是， α病毒对宿主细胞强烈的细胞毒性作用、相对短期的瞬时表士模式'以及相当高的病毒产物消耗，都是其缺点。然而，新的突变α病毒显示出了低毒性及长期表达的优点。尤其是高产量的膜蛋白（通常在重组系统中很难有较高水平的表达）有益于在结构生物学上的应用。《病毒也可以用于疫苗开发和基因治疗。
作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」
来源：丁香实验
操作方法
重 组 Ct 病毒载体的制备 材料 试剂 琼脂糖 Aprotinin (10 mg/ml) 仓鼠幼鼠的肾细胞（B H K -21) 使 用 B H K -21 黏附细胞培养物制备重组 S F V 和 S I N 颗 粒 ，用 B H K -21 悬浮细胞大量制备蛋白质产物。中 国 仓 鼠卵巢细胞（C H O K l ) 和 人 胚 胎 肾 细
纯化方法纯化方法 材料 试剂 吸收缓冲液 10m m o l /L 憐酸缓冲液（p H 7. 5) 10m m o l / L Na C l 亲和色谱树脂（M a t r e x Cellufine Sulfate， Millipore) 洗脱缓冲液（1〜2m o l /L N a C l 或 K C 1 蔗 糖（2 0 % 或 5
病毒滴度的确定病毒滴度的确定 材料 试剂 抗体 一 抗（抗靶抗原的特异抗体） 荧光素偶联的二抗（一抗特异性的) B H K - 2 1 细胞 根据研究，可以使用其他类型的细胞。 封闭缓冲液：含有〇.5 % 明胶海绵和 0•2 5 % 牛血清白蛋白的 P B S 完全培养基 针对使用的细胞类型选择。 D A B C
培养细胞系中基因表达的评估培养细胞系中基因表达的评估 材料 试剂 冰乙酸 Amplify (Amersham) 抗体 一 抗（针对目的抗原） 二 抗（针对一抗） 目 的 细 胞 系 .• B H K - 2 1、 C H O K l 、 H E K 293 C h a s e 培养基：添 加 2 m m o l/ L 谷氨酰胺、 20 m m
向海马区切片的组织培养物传递病毒向海马区切片的组织培养物传递病毒 材料 试剂 C u ttin g 培养基 1 0 m m o l/L M gC l2 0.5/umol/L 河肠毒素 大鼠海马区切片培养物 根据滚筒管配置制备大鼠海马区的组织型切片培养物。 病毒储存液 根 据 方 案 1 制备可表达目的基因的重组 a 病毒。 仪器 显
啮齿动物体内的病毒投递啮齿动物体内的病毒投递 材料 试剂 动物：大鼠或小鼠 B H K - 2 1 细胞 克他命 病毒储存液 根 据 方 案 1 制备可表达目的基因的重组 a 病 毒 ，使用前需要用〇 • 22 um 滤器过滤灭菌。 X ylazine 仪器 滤器•（无菌， 0.22um，微孔) H am ilton 注
