α-病毒：作为基因 转移载体的西门里克森林病毒和辛德毕斯病毒

重 组 Ct 病毒载体的制备 材料 试剂 琼脂糖 Aprotinin (10 mg/ml) 仓鼠幼鼠的肾细胞（B H K -21) 使 用 B H K -21 黏附细胞培养物制备重组 S F V 和 S I N 颗 粒 ，用 B H K -21 悬浮细胞大量制备蛋白质产物。中 国 仓 鼠卵巢细胞（C H O K l ) 和 人 胚 胎 肾 细

纯化方法 材料 试剂 吸收缓冲液 10m m o l /L 憐酸缓冲液（p H 7. 5) 10m m o l / L Na C l 亲和色谱树脂（M a t r e x Cellufine Sulfate， Millipore) 洗脱缓冲液（1〜2m o l /L N a C l 或 K C 1 蔗 糖（2 0 % 或 5

病毒滴度的确定 材料 试剂 抗体 一 抗（抗靶抗原的特异抗体） 荧光素偶联的二抗（一抗特异性的) B H K - 2 1 细胞 根据研究，可以使用其他类型的细胞。 封闭缓冲液：含有〇.5 % 明胶海绵和 0•2 5 % 牛血清白蛋白的 P B S 完全培养基 针对使用的细胞类型选择。 D A B C

培养细胞系中基因表达的评估 材料 试剂 冰乙酸 Amplify (Amersham) 抗体 一 抗（针对目的抗原） 二 抗（针对一抗） 目 的 细 胞 系 .• B H K - 2 1、 C H O K l 、 H E K 293 C h a s e 培养基：添 加 2 m m o l/ L 谷氨酰胺、 20 m m

向海马区切片的组织培养物传递病毒 材料 试剂 C u ttin g 培养基 1 0 m m o l/L M gC l2 0.5/umol/L 河肠毒素 大鼠海马区切片培养物 根据滚筒管配置制备大鼠海马区的组织型切片培养物。 病毒储存液 根 据 方 案 1 制备可表达目的基因的重组 a 病毒。 仪器 显

啮齿动物体内的病毒投递 材料 试剂 动物：大鼠或小鼠 B H K - 2 1 细胞 克他命 病毒储存液 根 据 方 案 1 制备可表达目的基因的重组 a 病 毒 ，使用前需要用〇 • 22 um 滤器过滤灭菌。 X ylazine 仪器 滤器•（无菌， 0.22um，微孔) H am ilton 注