纯化方法

纯化方法

材料

试剂

吸收缓冲液

10m m o l /L 憐酸缓冲液（p H 7. 5)

10m m o l / L Na C l

亲和色谱树脂（M a t r e x Cellufine Sulfate， Millipore)

洗脱缓冲液（1〜2m o l /L N a C l 或 K C 1

蔗 糖（2 0 % 或 5 0% ttz/V 水稀释）

T N E 缓冲液
50m m o l / L Tris-HCl (p H 7. 4)

100m m o l / L Na C l

0.l m m o l / L E D T A

仪器

离心机

离心浓缩器（Millipore)

超离心管

超离心转子 S W 40 T i 、 S W 41 T i 或 S W 28

方法

1.制 备（如果需要，激活）病毒储存液（方 案 1)。

2•纯化和浓缩病毒储存液。

蔗糖梯度超离心

a. 吸 取 Iml 5 0 % 蔗糖溶液至超离心管中。

b . 小心的加入一层 3m l 2 0 % 蔗糖，建立梯度。

c. 将病毒储存液（S W 40 T i 管需要 8m l ， S W 40 T i 管需要 9m l ) 缓慢加在梯度蔗糖溶液上面。

d. 4 °C ， 16 OOOg 离心 90m in。

病 毒 带 在 2 0 % 蔗 糖 和 5 0 % 蔗糖交界面附近。

e. 移去培养基部分和底部的 0.8m l (50% 蔗糖）收集病毒。

另外一种替代方法是，可以利用 2 0 % 蔗糖垫来沉淀病毒。用 SW2 8 转 子 4℃， 25 000r/m in离 心 2 h , 然 后 用 400ulT N E 缓冲液重悬病毒沉淀。

离心浓缩

可以用离心浓缩仪来快速而简单的浓缩病毒储存液。

a. 根据厂商说明将病毒样品加入离心浓缩仪的样品槽中。

b•根据厂商推荐的速度离心直至液体在滤液收集槽的内部和外侧都平衡。

c. 将离心浓缩仪取下，然后揭开密封盖，弃去滤液。

d. 盖上盖子再次离心。

e•弃去滤液，取下离心浓缩仪。

f. 收集浓缩的病毒。

如果需要更高的病毒浓度，可以再次离心。

亲和色谱浓缩

亲和色谱可以除去内毒素和其他污染物同时 10 倍浓缩病毒。

a•根据厂商说明用 M atrex Cellufine su lfa te 树脂装填亲和色谱柱。

b. 用数倍树脂床体积的吸收缓冲液平衡柱子。

c•在 p H 7. 5 条件下上样病毒样品。

d. 用数倍树脂床体积的吸收缓冲液洗涤柱子以除去非结合性的污染物。

e. 用洗脱缓冲液洗脱病毒。

f. 收集多个组分。通过实验感染确定病毒浓度峰值来确定组分。